Vero细胞以0.01的感染多重性(MOI)感染每种病毒,持续一小时。病毒已被删除;用DPBS洗涤细胞,并覆盖新鲜的MEM,补充有2%FBS和2倍稀释的法匹拉韦(1,000至0.98μM)。在感染后48小时收集上清液样品(HPI)并滴定。病毒产量降低计算为与未处理对照相比病毒滴度降低的百分比。在没有病毒感染的情况下,使用基于中性红色的体外毒理学测定试剂盒(Sigma-Aldrich)测定法匹拉韦的细胞毒性 50%有效浓度(EC50)和50%细胞毒性剂量(CC50)测定为法匹拉韦浓度,其中病毒滴度在相应时间点为未处理对照的50%,法匹拉韦浓度导致50%细胞毒性,并使用回归分析计算。选择性指数(SI)使用公式SI = CC计算50/电子商务50。
法匹拉韦(Favipiravir)对于Vero细胞感染的有效性
Vero细胞感染rNiV-Gluc-eGFP(MOI为0.01)。在一个HPI下,取出接种物,用DPBS洗涤细胞,并加入新鲜培养基。在250 μM的1、2、4、6、12和24 HPI下加入法匹拉韦,并在24、48和72 HPI下取样上清液。在指定的时间点通过荧光显微镜对细胞进行成像。通过斑块测定测定病毒滴度,并按照制造商的方案使用Biolux®高斯荧光素酶测定试剂盒(新英格兰生物实验室,伊普斯威奇,马萨诸塞州)测量高斯荧光素酶活性。荧光素酶读数使用模量™光度计(特纳生物系统,桑尼维尔,加利福尼亚州)记录。所有实验均以生物一式三份进行,并以倍数变化报告数字以比较两个单独的实验。
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