为了预测赋予劳拉替尼耐药性的ALK突变， 对ALK阳性癌症的Ba/F3模型进行了加速N-乙基-N-亚硝基脲（ENU）诱变筛选。 利用已建立的Ba/F3细胞系表达非突变EML4-ALK来模拟ALK抑制剂初治性疾病，或利用携带单个ALK耐药突变的突变EML4-ALK来模拟第一代或第二代ALK抑制剂后的耐药性疾病。如先前报道的，这些Ba/F3模型对不同的ALK抑制剂表现出不同的敏感性，劳拉替尼对所有模型都保持显着的效力.
为了确定是否有任何单个ALK突变能够对表达非突变EML4-ALK的劳拉替尼，Ba/F3细胞（变体1（E13;A20）或变体3a（E6a;A20），代表NSCLC中最常见的两种EML4-ALK变体）用ENU化学诱变，ENU是点突变的有效诱导剂。用ENU处理后，在一系列克唑替尼或劳拉替尼浓度（100nM–1000nM）存在下培养诱变细胞，模拟临床药物暴露.分离新出现的耐药克隆，并对DNA进行测序以鉴定ALK激酶结构域突变。由于100nM的克唑替尼不足以阻止非诱变细胞的生长，因此该剂量的克唑替尼被排除在 的分析之外;长期细胞增殖测定证实，所有其他浓度的克唑替尼和劳拉替尼阻止了非诱变细胞的生长，结果总结如下。
观察到许多耐药克隆在用300-600nM克唑替尼处理后出现。这些克唑替尼耐药克隆携带多种单一ALK激酶结构域点突变，包括在临床标本中鉴定的大多数克唑替尼耐药突变。相比之下，用300-600nM劳拉替尼.该药物浓度范围与体内达到的血浆暴露相当，因为大多数以标准剂量劳拉替尼治疗的患者未结合的药物水平超过369nM。值得注意的是，在用100nM劳拉替尼处理后确实出现了少量克隆，并且发现主要携带ALKI1171N或不太常见的ALKL1196M突变。值得注意的是，与其他ALK突变体相比，表达这两种特定ALK突变体的Ba/F3细胞对劳拉替尼的敏感性略低，如相对较高的IC所示50在细胞测定.然而，这些突变体在较高（和临床上可实现的）劳拉替尼浓度.这些结果与先前的研究一致，这些研究未能确定足以赋予劳拉替尼高水平耐药性的单个ALK突变，并表明洛拉替尼治疗可能能够抑制所有单个ALK耐药突变的出现。
许多患者在劳拉替尼之前使用第二代ALK酪氨酸激酶抑制剂（TKI）会出现疾病进展，这些癌症中约有一半可能具有靶向ALK耐药突变。为了概括这种临床环境， 对表达EML4-ALK的Ba/F3细胞进行了ENU诱变筛选，这些细胞都含有第一代和第二代ALK抑制剂（C1156Y，F1174C，L1196M，G1202R和G1269A）失败后观察到的最常见的ALK抗性突变之一。由于每个单独的EML4-ALK突变体对劳拉替尼， 首先使用长期细胞增殖测定。ENU诱变后，Ba/F3细胞在劳拉替尼存在下培养，其浓度可防止每个突变体的生长。筛选中使用的劳拉替尼的最低浓度为C1156Y和F1174C的50 nM，G1269A的100 nM，L1196M和G1202R的300 nM。总体而言，这些结果揭示了广泛的化合物ALK突变，可以介导对劳拉替尼的靶向耐药性。
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