TAF是否直接影响ISRE依赖性转录

　　为了检查TAF是否直接影响ISRE依赖性转录，我们使用pISRE-TA-Luc进行了记者基因检测，该编码在ISRE的控制下编码荧光素酶（Luc）基因，该基因负责I型IFN刺激。对照和TAF-1 KD细胞之间的萤光素酶活性没有明显变化，表明TAF-1在由ISGF3复合物调节的ISRE依赖性转录中没有直接作用。这似乎与显示的结果相矛盾，ISGmRNA水平在TAF-1 KD细胞中增加了。

　　由于核小体结构，与组蛋白H1与染色质的结合和远端元件对染色质的影响，从瞬时转染的基因和稳定整合的基因中转录的表达方式有所不同。因为TAF-1具有组蛋白伴侣活性，并且是INHAT复合物的主要成分，所以我们假设TAF可能通过染色质结构调节来控制ISG转录。 TAF-Iα和β共有的C末端酸性结构域对于其组蛋白伴侣活性和INHAT活性至关重要。我们为缺乏酸性结构域的TAF-IΔC突变体构建了表达载体，并进行了抢救实验，以检查组蛋白伴侣活性和/或INHAT活性对于TAF-1对ISG转录的影响是否必不可少。

　　在TAF-I siRNA表达载体转染的细胞中观察到siRNA靶序列修饰的Flag标记的TAF-Is的表达，并抑制了TAF-I KD增强的ISG转录通过野生型TAF-I而不是TAF-IΔC，表明对组蛋白伴侣活性至关重要的TAF-I的酸性结构域在ISG的调节中起着作用为了检查TAF是否影响内源ISG启动子上的转录复合物形成，我们进行了ChIP分析以测量在有或没有IFN的情况下TAF-1 KD中STAT1，STAT2和Pol II的量。与对照组相比，在IFN刺激后的早期时间点，TAFKD细胞中与ISG启动子结合的STAT1，STAT2和Pol II的水平升高。这些发现表明TAF-I影响ISG启动子上转录复合物的形成，我们预测上述作用是由TAF-I介导的染色质变化引起的。因此，我们使用抗组蛋白H3（H3）和乙酰化组蛋白H3（H3K9 / 14Ac）的抗体进行ChIP分析，已知后者与主动转录的基因有关，其乙酰化水平受启动子调控相关的HATs，例如p300 / CBP和GCN5。

　　qRT-PCR分析表明，在有或没有IFN处理的情况下，TAF-1 KD细胞和对照细胞在ISG启动子上的组蛋白H3的量没有显着差异。交流电在没有IFN的情况下，TAFKD细胞中的乙基化组蛋白H3与对照细胞中的H3保持不变，但是在IFN刺激下，TAFKD细胞中的乙酰化组蛋白H3在早期就增加了。由于STAT与HAT相互作用并以IFN依赖性的方式将它们募集到ISG启动子。

　　因此TAFKD细胞中乙酰化组蛋白H3的数量增加可能是由于ISG15启动子上的STAT数量增加所致。此外，使用针对接头组蛋白H1.2（H1）的抗体进行的ChIP分析（H1亚型是一种在HeLa细胞中高度表达的组蛋白H1亚型，与体内TAF-1相关），证明了在没有IFN的情况下以及在IFN刺激的早期时间点，TAF-1 KD细胞ISG启动子上的组蛋白H1明显降低。这些结果表明TAF调节了ISG启动子上的组蛋白H1，但在ISG转录中不充当组蛋白H3-H4分子伴侣或INHAT。接下来，我们解决了组蛋白H1是否调节ISG转录的问题。 我们使用组蛋白H1 siRNA表达载体制备了组蛋白H1 KD细胞。 使用该载体，观察到组蛋白H1 KD细胞中组蛋白H1蛋白的残留水平约为对照细胞的25％。 为了检查对ISGs转录诱导的影响，我们测量了组蛋白H1 KD细胞中ISG mRNA的水平。现在taf哪能买到？价格是多少？需要的话可以添加下方的微信二维码。