瑞戈非尼(Regorafenib)靶向结直肠癌的上皮间质转化

　　众所周知，上皮间质转化 (EMT) 会引起癌症侵袭/转移，导致转移性结直肠癌 (mCRC) 患者的死亡率很高。蛋白质酪氨酸磷酸酶 (PTPase) 靶向治疗已被确定为一种新型癌症治疗方法。以前，我们证明了具有抗 EMT 效力的索拉非尼通过直接激活含 SH2 结构域的磷酸酶 1 (SHP-1) 依赖性 p-STAT3Tyr705来防止 TGF-β1 诱导的 EMT/侵袭抑制肝细胞癌。瑞戈非尼（Regorafenib）具有与索拉非尼密切相关的化学结构，被批准用于 mCRC 的药物治疗。在此，我们评估瑞戈非尼是否以与索拉非尼相同的方式激活 PTPase SHP-1 以消除 CRC 中与 EMT 相关的侵袭/转移。值得注意的是，瑞戈非尼（Regorafenib）在体外发挥有效的抗 EMT 活性以抑制 TGF-β1 诱导的 EMT/侵袭，并在体内抑制 SW480 间充质细胞的肺转移性生长。机制上，瑞戈非尼（Regorafenib）增强的 SHP-1 活性通过低 p-STAT3Tyr705显着阻碍 TGF-β1 诱导的 EMT/侵袭由 SHP-1 抑制剂或 siRNA 介导的 SHP-1 耗竭所证明的水平。相反，SHP-1 的过表达进一步增强了瑞戈非尼对 TGF-β1 诱导的 p-STAT3Tyr705和 EMT/侵袭的抑制作用。Regorafenib 通过有效缓解 SHP-1 的自身抑制的 N-SH2 结构域直接激活 SHP-1，从而抑制 TGF-β1 诱导的 p-STAT3Tyr705和 EMT/侵袭。重要的是，临床证据表明 SHP-1 与 E-cadherin 呈正相关，这显着决定了 CRC 患者的总生存期。这一结果进一步证实了我们的体外数据表明，SHP-1 是 EMT 调节中的负调节 PTPase，可作为 mCRC 治疗的药理学靶点。总的来说，通过 regorafenib 激活 PTPase SHP-1 专注于其抗 EMT 活性可能是 mCRC 的有用药物治疗。

　　mCRC 出现的原因是高度复杂和异质的，当目前可用的多种靶向治疗（如抗 EGFR 抗体西妥昔单抗和帕尼单抗，以及 VEGF 抑制剂贝伐单抗和阿柏西普）出现耐药时，通常会导致患者显着死亡率。最近，（Regorafenib）成为第一个获得批准的 mCRC 药物疗法，作为 TKI 阻断肿瘤发生、血管生成和转移相关的关键分子标志物。在这里，我们进一步深入了解（Regorafenib）的 PTPase SHP-1 靶向治疗与据报道参与癌症侵袭/转移的 CRC EMT 之间的关系。我们提供的证据表明，瑞戈非尼通过激活 PTPase SHP-1 依赖性 p-STAT3在体外抑制 TGF-β1 诱导的 EMT/侵袭Tyr705抑制。通过野生型 SHP-1 的功能获得性过表达来增加 PTPase SHP-1 活性进一步加强了瑞戈非尼对 TGF-β1 诱导的 p-STAT3Tyr705和 EMT/侵袭的负面影响。相反，降低 PTPase SHP-1 活性可显着恢复瑞戈非尼对 p-STAT3Tyr705和 EMT/侵袭的负面影响，如 SHP-1 抑制剂或 siRNA 介导的 SHP-1 耗竭所证明的那样。总之，我们有一个新的发现，即瑞戈非尼通过提供 SHP-1 激动剂来激活 SHP-1 的活性，作为 EMT 相关的抑制剂，从而发挥抗 EMT 效力。我们的体内数据还表明，瑞戈非尼通过尾静脉注射转移模型抑制 SW480 间充质细胞的转移性生长。然而，仍然缺乏来自体内动物研究的足够数据。因此，在建立将细胞植入脾脏后观察肝转移的原位转移模型时，应更加注意。使用这种方法代替通过尾静脉注射转移模型检查肺转移将是进一步支持我们的体外研究结果的可靠方法。

　　从机制上讲，瑞格非尼有效地增加了 SHP-1 的活性，因为瑞格非尼与 SHP-1 的 N-SH2 和催化 PTP 结构域的对接潜力减轻了 SHP-1 的自身抑制，从而导致 p-STAT3Tyr705和 EMT的减少/由TGF-β1诱导的侵袭。有趣的是，我们之前的数据表明，瑞戈非尼的类似物索拉非尼通过直接激活 PTPase SHP-1 依赖性 p-STAT3Tyr705抑制在 HCC 临床前模型中在体外和体内显示出显着的抗 EMT 活性。总之，这些发现有力地证实了负调节 PTPase SHP-1 是一种 EMT/转移抑制基因，其活性可以被 TKI 药理学激活，这些 TKI 不仅作为 STAT3 抑制剂，而且作为 SHP-1 激动剂，如瑞戈非尼和索拉非尼。

　　大量证据表明，E-钙粘蛋白的丢失是诱导癌细胞 EMT/转移所必需的。另一方面，E-钙粘蛋白表达的恢复增强了细胞间粘附，并抑制了 EMT/转移 。在这里，通过 Kaplan-Meier 分析对 243 名 CRC 患者进行分析，在 SHP-1 和 E-cadherin 均具有强表达的患者中，中位 OS 不可用。相比之下，SHP-1 和 E-cadherin 表达较弱的患者中位 OS 的降低比其他患者更显着。这些观察结果表明，具有高水平 SHP-1-E-cadherin 表达的患者显示出更长的生存期。此外，临床数据显示，CRC组织中SHP-1与E-cadherin的表达呈显着正相关。有趣的是，E-cadherin 而不是 SHP-1 的表达与组织学分级呈负相关。这些数据表明 SHP-1 可能不是 E-cadherin 的唯一上游正调节剂。其他上游调节剂也可能积极控制 E-cadherin 的表达以最终建立粘附连接。例如，GSK-3β 通过负控制 SNAIL/SLUG 的稳定性来正调节 E-cadherin，作为 E-cadherin 的阻遏物。此外，据报道，MicroRNA-200a 作为 EMT 相关的肿瘤抑制因子，通过下调 ZEB1/2 来上调 E-cadherin，作为 E-cadherin 的抑制因子。因此，E-cadherin 而不是 SHP-1，与组织学分级呈负相关，这可能是因为 E-cadherin 的其他上游调节因子对于诱导 E-cadherin 的表达是必不可少的，E-cadherin 作为直接的下游效应子和显着与分化良好的低等级细胞相关。SHP-1 是 E-cadherin 的上游正调节因子之一，在本研究中不是直接与组织学分级相关的独立效应因子。总的来说，这些临床数据进一步证实了体外发现 SHP-1 是一种 EMT 相关抑制因子，通过抑制 p-STAT3Tyr705上调 E-cadherin 。

　　总之，这是第一份显示瑞戈非尼（Regorafenib）和 CRC EMT 之间新联系的报告。瑞戈非尼通过激活 PTPase SHP-1 依赖性 p-STAT3Tyr705指导体外和体内抗 EMT/转移治疗抑制。Regorafenib 具有有效的抗 EMT 活性，可作为 SHP-1 激动剂，通过缓解 SHP-1 的自身抑制作用。值得注意的是，SHP-1 不仅被确定为 EMT/转移的抑制剂，而且还被确定为瑞戈非尼的药理学靶点。此外，我们在 SHP-1-E-cadherin 轴与 CRC 患者的总体存活率之间建立了一种新的联系。这项研究的结果可能会指导开发针对多线治疗失败的 mCRC 患者的替代 PTPase 靶向治疗，并表明瑞戈非尼（Regorafenib）中的抗 EMT 效力显着激活 PTPase SHP-1 依赖性 STAT3 失活，并可能提供mCRC的直接药物治疗。

　　微信扫描下方二维码了解更多：