8p11 骨髓增殖综合征是一种罕见的侵袭性骨髓增殖性肿瘤，其特征是组成型活性 FGFR1 融合蛋白，由特定的染色体易位产生并驱动异常增殖。尽管 FGFR1 抑制剂已在体外显示出对 FGFR1 融合的活性，但没有一种药物在临床上使用，因此需要评估其他化合物作为潜在的治疗方法。在这里，我们使用细胞系和原代细胞来研究帕纳替尼 (普纳替尼)。由ZMYM2-FGFR1和BCR-FGFR1和FGFR1OP2-FGFR1转化的帕纳替尼处理的 Ba/F3 细胞与对照细胞相比，阳性 KG1A 细胞系显示出增殖减少和存活率降低。抑制诱导细胞凋亡并降低 FGFR1 融合蛋白和底物的磷酸化。与对照相比，来自 8p11 骨髓增殖综合征患者 (n=5) 的帕纳替尼 (普纳替尼)处理的细胞表现出减少的集落生长。在一名可评估的患者中，帕纳替尼 (普纳替尼)特异性减少了FGFR1融合基因阳性菌落的数量。因此，普纳替尼在治疗 8p11 骨髓增生综合征患者方面显示出相当大的前景。
选择性激酶抑制剂的靶向治疗已经彻底改变了酪氨酸激酶异常激活的许多恶性肿瘤的治疗，其中的范例是伊马替尼治疗BCR-ABL阳性慢性髓细胞白血病。伊马替尼对 FGFR1 没有活性，因此已经对许多其他化合物进行了实验评估，用于治疗 EMS，包括 PKC412（midostaurin）、SU5402、PD1730747和TKI258，但目前这些都不是一般临床使用。两份报告描述了使用 PKC412 和索拉非尼治疗单个患者但在这两种情况下，都没有令人信服的证据表明对FGFR1融合基因的水平有不同的影响。因此，仍然需要研究用于治疗 EMS 的其他化合物。在这里，我们评估了帕纳替尼治疗 EMS 患者的潜力。帕纳替尼 (普纳替尼)是一种口服的多靶点抑制剂，对包括 ABL、FGFR1、FLT3、KIT 和 PDGFRA 在内的多种激酶具有活性，目前正在对 CML 和BCR-ABL阳性急性淋巴细胞白血病的临床试验进行评估。
帕纳替尼 (普纳替尼)抑制FGFR1融合基因和 KG1A 细胞系转化的 Ba/F3 细胞的增殖和存活
Ba/F3 细胞系的生存和增殖依赖于 IL3，但可以通过表达活化的癌基因（如酪氨酸激酶融合基因）转化为不依赖 IL3。由BCR-FGFR1(Ba/F3-BF) 和ZMYM2-FGFR1(Ba/F3-ZF)转化的 Ba/F3 细胞因此变得独立于 IL3，提供了用于评估 FGFR1 抑制的模型系统。与单独使用载体相比，在使用帕纳替尼治疗时，在 Ba/F3-BF 和 Ba/F3-ZF 中观察到了更大的剂量依赖性增殖和存活下降（IC50值分别 = 22 nM、29 nM 和 792 nM）。与载体对照相比，两种融合基因的细胞数量净减少幅度更大，即 48 小时的 MTS 读数低于第 0 天的 MTS 读数）。Western印迹表明，增加帕纳替尼 (普纳替尼)浓度伴随着FGFR1融合蛋白和下游信号蛋白ERK和STAT5的磷酸化减少。随着帕纳替尼剂量的增加，Ba/F3-BF 细胞系中 lamin-A 和 PARP 的切割增加（caspase-3 切割不是 Ba/F3 细胞凋亡的良好指标）表明细胞凋亡导致细胞死亡。
KG1A 细胞系含有FGFR1OP2-FGFR1融合基因，因此提供了另一种评估 FGFR1 抑制的模型。与FGFR1融合基因阴性的 HL60 和 HEL 细胞系相比，帕纳替尼 (普纳替尼)降低了 KG1A 的增殖和存活。蛋白质印迹显示 FGFR1 融合蛋白和 STAT5 的磷酸化降低（ERK在KG1A中不是组成型磷酸化的，因此，这里不检查）。切割的半胱天冬酶 3 和切割的 PARP 随着抑制剂浓度的增加而增加，表明细胞凋亡水平增加。这些结果与最近的一项研究一致，该研究证明了帕纳替尼 (普纳替尼)对CUX1-FGFR1转化的 Ba/F3 细胞的活性。
帕纳替尼 (普纳替尼)抑制 EMS 患者原代细胞的增殖和存活
在甲基纤维素集落试验中，将来自 5 名FGFR1易位患者的原代冷冻保存细胞暴露于帕纳替尼，并将生长与正常对照样本中的生长情况进行比较。总体而言，与正常对照组相比，帕纳替尼 (普纳替尼)治疗导致患者的菌落生长显着降低（t 检验，P<0.05）。在所有波纳替尼浓度下都观察到了降低，但由于数量较少，每个浓度的差异没有统计学意义。
对于病例 1、4 和 5，从第 14 天的平板上摘取菌落进行 FISH 分析，来自 2 名患者的细胞在用 500 nM 普纳替尼处理的培养物中仅生长 FGFR1 融合基因阳性菌落，表明FGFR1融合阴性细胞的发生率非常低。第三名患者（病例 5，ZMYM2-FGFR1阳性）在处理过的培养物中显示出ZMYM2-FGFR1阴性菌落，这使我们能够评估处理过的与处理过的融合基因阳性和阴性菌落的差异生长。未经处理的培养物。与 ZMYM2-FGFR1 阴性菌落相比，在较低浓度的帕纳替尼下，ZMYM2-FGFR1 阳性菌落的数量显示出更大的减少。反映了 Ba/F3 帕纳替尼反应试验中观察到的效果。在 20 nM 帕纳替尼 (普纳替尼)时，ZMYM2-FGFR1阳性菌落的比例下降了 38%，即从未经处理的培养物中的 0.74 下降到 0.46（χ2，P> 0.001）。
总之，我们已经证明，帕纳替尼 (普纳替尼)在 EMS 中对 FGFR1 融合蛋白具有明显的活性，因此具有治疗目前治疗不足的这种罕见的 MPN 患者亚群的潜力。
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