taf对于生物细胞的影响在果蝇体内作用

　　Prodos是细胞活力所必需的蛋白质，已显示其包含与TAF选择性异源二聚体的HFD。因此，已经提出，PDS可以是dTFIID组件。在这里，我们显示PDS在HFD和HFD的第二个域C端均与yTAFII65共享序列相似性。我们表明，酵母生存能力所需的部分冗余功能域。 PDS共有yTAFII65体内功能所需的HF和TAP结构域，以及与dTAFII16的异二聚体，这一事实表明PDS是yTAFII65的果蝇同源物。通过逆转录（RT）分离了编码mTAFII140HFD的cDNA。-PCR使用小鼠F9胚胎癌细胞RNA和基于表达的序列标签序列的寡核苷酸引物进行。

　　为了分离全长cDNA，用32P标记的HFD片段筛选了F9胚胎癌cDNA文库。分离了包含5非翻译区（UTR）和氨基酸1至340的克隆。通过用衍生自EST序列的寡核苷酸探针筛选相同的文库，分离出编码氨基酸238至747的第二个重叠克隆。通过RT-PCR使用在氨基酸651处的寡核苷酸引物和在UTR中源自EST序列的引物，通过RT-PCR克隆cDNA的端。将部分cDNA序列克隆到pBSK中并测序。通过重叠PCR将三个cDNA组装成两个部分重叠的片段。在一个片段中，在不改变氨基酸序列的情况下在核苷酸处引入了BamHI位点。将该片段克隆到表达载体。用含有BamHI和XhoI位点的引物扩增从核苷酸1286到编码序列末端的片段，并将得到的片段克隆到含有5'片段的pXJ41载体中，从而重建了完整的开放阅读框。克隆了包含5'UTR和第1至727位氨基酸基因的片段。所有构建体均通过自动DNA测序验证，并可根据要求提供更多详细信息。针对人和小鼠TAFII140的抗体针对的是对应于hTAFII140氨基酸108至127的合成肽生成的抗体与卵清蛋白偶联。如先前所述产生单克隆抗体。

　　使用了两种所得的单克隆抗体1C7和2F5。从用细菌表达的谷胱甘肽S-转移酶（GST）-融合蛋白免疫的兔中收集抗BIP2多克隆抗血清，所述融合蛋白包含BIP2蛋白的氨基酸残基719至909。抗SAP130和GCN5抗体如先前所述。抗TBP单克隆抗体2C1和3G3以及抗TAFII单克隆抗体如先前所述。针对多克隆抗血清如先前所述。如前所述，用单克隆抗体2C1对HeLa细胞核提取物进行免疫沉淀，并用表位肽进行洗脱。果蝇胚胎提取物的免疫沉淀如先前所述进行。通过标准技术进行蛋白质印迹，并使用ECL试剂盒和放射自显影法检测蛋白质。使用具有适当限制位点的引物通过PCR构建所有酵母和细菌表达载体，并通过自动DNA测序验证构建体。可应要求提供详细的结构。

　　在包含TRP1标记的多拷贝载体pBTM116中构建LexA融合体，在包含LEU2标记的多拷贝载体pASV3中构建VP16融合体，并按照前述方法对L40菌株进行测定。如先前所述，对各个L40转化子进行定量β-半乳糖苷酶测定。在几个独立的实验中获得了可重现的结果，并且在图中显示了典型实验的结果。通过质粒改组技术进行了互补测定。将野生型或突变的TAF克隆到带有LEU标记的多拷贝pAS3质粒中。通过LiAc技术转化所有酵母菌株。如前所述，通过芽孢形成和四分体解剖，从YSLS41衍生出用于TAF65质粒改组的酵母菌株YSLS58。对于互补测定，我们使用了指定的拯救质粒。产生了多克隆抗dBIP2血清。 在免疫染色中，抗dBIP2血清而不是免疫前的血清在果蝇整个胚胎发生过程中都识别出一个普遍表达的核蛋白。该抗体还将dBIP2蛋白专门定位在多烯染色体上 对应于转录活性染色质中RNA聚合酶II起始位点的泡芙和带间的缩合区域。相反，在转录失活的异染色质中未发现 着丝粒周围。现在taf哪能买到？价格是多少？需要的话可以添加下方的微信二维码。