法匹拉韦的给药。首先将一片左肺在10mL氯化钠0.9%溶液中洗涤,用滤纸吸干,称量,然后转移到含有1mL0.9%氯化钠溶液和3mm玻璃珠的2 mL管中。使用组织裂解机(Retsch MM400)以30个循环/秒的速度在10分钟内粉碎,然后在16,200 ×g下离心5分钟。将上清液培养基转移到2 mL管中,以16,200 ×g离心10分钟并储存在-80°C。 在含有 100 μL 0.5 M EDTA 的 2 mL 管中收获 1 毫升血液(赛默飞世尔科技)。将血液以16,200×g离心10分钟,并在-80°C下储存。
新冠药物法匹拉韦(Favipiravir)在动物实验中的药代动力学
血浆和肺组织中法匹拉韦的定量采用经过验证的灵敏和选择性验证的高效液相色谱联合串联质谱法(UPLC-TQD,沃特世,美国),定量下限为0.1 μg/mL。在校准范围(0.5 μg/mL至100 μg/mL)内,三种质量控制样品(QC)的精密度和准确度均在15%以内(Bekegnran等人,提交)。法匹拉韦通过简单的蛋白质沉淀法提取,血浆使用乙腈,澄清肺匀浆使用冰冷的乙腈。简而言之,将50μL样品基质加入到含有内标(法匹拉韦-13C,15N,Alsachim)的500μL乙腈溶液中,然后涡旋2分钟,然后在4°C下离心10分钟。 蒸发上清液培养基,然后将干燥的残留物转移到96孔板中,并注入50μL。为了评估方法和基质效应的选择性和特异性,在每次运行中处理来自2只对照动物(未感染和未处理)的空白血浆和组织匀浆。此外,还处理了加标法匹拉韦浓度相当于QC(0.75、50和80 μg/mL)的相同对照样品,并与QC样品进行了比较。
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