血清莫洛匹韦/莫诺拉韦及其主要代谢物NHC（EIDD-1931）的分析是通过修改先前验证和发表的人类样本方法进行的。简而言之，莫洛匹韦/莫诺拉韦的储备溶液（EIDD-2801;NM Pharmtech，纯度99.0%）和NHC（EIDD-1931;MedChemExpress，美国新泽西州蒙茅斯交界处，纯度为99.73%）在甲醇中以2 mg/mL制备并储存在-80°C。
血清莫洛匹韦（Molnupiravir）/莫诺拉韦浓度的LCMSMS定量和药代动力学分析
将储备溶液进一步稀释在甲醇中，以产生校准标准品，用于莫洛匹韦/莫诺拉韦和NHC组合为1、5、10、50和100 ng/mL的低浓度曲线，以及单独使用250、500、750、1000、2500和5000 ng/mL NHC的高浓度曲线。校准曲线是通过强化从加州大学戴维斯分校兽医教学医院的临床病理学实验室获得的空白猫血清（从6个人合并）生成的。以10和100 ng/mL（莫洛匹韦/莫诺拉韦和NHC组合）以及500 ng和2500 ng（仅限NHC）生成质控样品。将校准品和QC血清样品（100μL）加入300μL乙腈中（与体内PK研究中的样品一样），然后将所有校准品、QC和未知样品涡旋混合5分钟，然后在4°C下以10，000×g离心5分钟。
离心后，除去275μL上清液，转移到干净的2 mL微量离心管中，并在SpeedVac（德国汉堡埃彭多夫）中蒸发至干（约1小时）。将样品复溶于100μL起始HPLC流动相（98%1 mM乙酸铵pH 4.3和含1 mM乙酸铵的2%乙腈）。为了进行分析，将5μL进样到LC-MS/MS系统中。
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