莫洛匹韦/莫诺拉韦处理对Caco2细胞系中HCoV-NL63复制的剂量依赖性抑制。通过qRT-PCR定量的细胞内病毒RNA归一化为管家基因GAPDH,并相对于对照(CTR)(设置为1)(n=6)呈现。在处理Caco2细胞系中不同浓度的莫洛匹韦/莫诺拉韦时,复制HCoV-NL63基因组RNA的中间体dsRNA(红色)的免疫荧光显微镜分析。
莫洛匹韦(Molnupiravir)/莫诺拉韦对HCoV-NL63的抗病毒作用
细胞核由DAPI(蓝色)可视化。Caco2细胞在不同浓度莫洛匹韦/莫诺拉韦的处理中以0.1的MOI感染HCoV-NL6344448小时。通过qRT-PCR定量细胞上清液中的病毒产量。通过MTT测定测定细胞毒性。使用GraphPad Prism 8.0.2软件基于模型Y=100/(1+10^(LogEC50-X))计算了一半最大有效浓度(EC50)和一半最大细胞毒性浓度(CC50)。Caco2细胞以MOI为0.5感染HCoV-NL63,然后未经处理或用5μM莫洛匹韦处理5天。每天收集上清液,通过qRT-PCR定量分泌的病毒,计算基因组拷贝数(n=6)。Caco2细胞用0.5MOI HCoV-NL63感染,然后未经处理或用5或50μM莫洛匹韦/莫诺拉韦处理48小时。通过TCID50测定法测定不同组的病毒滴度(n=6)。
HCoV-NL63在暴露于未莫洛匹韦/莫诺拉韦(作为对照)或增加莫洛匹韦/莫诺拉韦浓度的Caco2细胞中连续传代20次。在第1-10代中使用5μM莫洛匹韦,在随后的传代中增加到10μM。使用qRT-PCR定量莫洛匹韦(5μM)对在第5,10,15和20代收获的HCoV-NL63的影响。
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