将法匹拉韦(Favipiravir)溶解在浓度为100mM的二甲基亚砜(DMSO)中,等分,并储存在-70°C。 为了用于实验,将溶液解冻并在DMEM中稀释以达到每个实验中指示的所需浓度。在感染前14小时用法匹拉韦预处理细胞,在没有药物的情况下将病毒吸附到细胞上1小时,然后在相同药物浓度存在下继续感染。
在法匹拉韦存在下通过感染接种在2ml细胞培养基中的M6平板上的Vero细胞单层来进行连续传代;在感染后72小时收集0.5ml上清液(HPI)并用于下一次感染。第一次传代是在0.1 PFU/细胞(4×105感染 4 × 10 的细胞4病毒的PFU)。模拟感染的细胞并行保持以控制没有污染病毒。当在法匹拉韦存在下多次传代后未观察到细胞病变效应(CPE)时,使用细胞培养上清液在没有药物的情况下进行多达5次盲传代,以确定没有传染性病毒可以回收。盲传前后缺乏可检测到的CPE被认为是裂谷热病毒灭绝的标准。
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