雷德帕斯(midostaurin)在伯基特淋巴瘤中的抗肿瘤活性

　　强化短期化疗方案显着延长了伯基特淋巴瘤 (BL) 患者的总生存期，而添加利妥昔单抗进一步改善了这一生存期。然而，利妥昔单抗耐药性的必然发展和化疗的毒性仍然是障碍。我们首先制备了两种对利妥昔单抗介导的 CDC 具有抗性的 BL 细胞系。使用磷酸化抗体微阵列，我们发现 PI3K/AKT 途径含有最多的磷酸化蛋白质/命中，而可能受 PKC 调节的细胞凋亡途径在抗性细胞中表现出最大的倍数富集。PI3K/AKT 抑制剂 IPI-145 未能逆转耐药性。相比之下，pan-PKC 抑制剂雷德帕斯（midostaurin）在原始细胞和耐药细胞中均表现出有效的抗肿瘤活性，单独或与利妥昔单抗联合使用。尤其，雷德帕斯通过降低 PKC 的磷酸化，进而降低下游 Bad、Bcl-2 和 NF-κB 的磷酸化来促进细胞凋亡。因此，雷德帕斯（midostaurin）通过补充促凋亡作用提高了利妥昔单抗的活性。在体内，与单独使用利妥昔单抗治疗相比，单独使用 midostaurin 可有效延长携带耐药 BL 细胞的小鼠的存活时间。与利妥昔单抗相比，在利妥昔单抗中加入米多司林可显着提高生存率，但米多司司林单药治疗则不然。我们的研究结果要求进一步评估米多司林单独或与利妥昔单抗联合治疗耐药性 BL。与单独使用利妥昔单抗治疗相比，单独使用雷德帕斯（midostaurin）可有效延长携带抗性 BL 细胞的小鼠的存活时间。与利妥昔单抗相比，在利妥昔单抗中加入米多司林可显着提高生存率，但米多司司林单药治疗则不然。我们的研究结果要求进一步评估米多司林单独或与利妥昔单抗联合治疗耐药性 BL。

　　在本研究中，我们发现 PKC 在利妥昔单抗耐药的 BL 细胞中高度上调和激活。pan-PKC 抑制剂雷德帕斯（midostaurin）单独给药或与利妥昔单抗联合给药可有效引发细胞凋亡并显着改善 OS，尤其是在耐药 BL 细胞中。尽管 PKC 在癌症发展中的作用仍存在争议，但 PKC 抑制剂在临床试验中被广泛测试用于治疗多种类型的癌症。2017 年 4 月，雷德帕斯（midostaurin）被批准用于治疗具有 FLT3 突变和晚期 SM 的 AML。目前，没有在临床试验网站上注册 BL 治疗的临床试验，尽管有少数研究报告了 BL 细胞中 PKC 激活的重要性。因此，我们的研究结果表明，必须单独或联合利妥昔单抗进行雷德帕斯的临床试验，优选用于复发/难治性 BL 患者，也可能用于其他具有高度活化 PKC 的复发/难治性 NHL 患者。

　　利妥昔单抗在治疗多种 B 细胞淋巴瘤方面取得了巨大成功。利妥昔单抗可通过与膜上的 CD20 结合，主要通过 ADCC 和 CDC 破坏表达 CD20 的淋巴细胞。然而，对利妥昔单抗的耐药性仍然是复发/难治患者的主要挑战。尽管有 CD20 表达，但大约 50% 的患者对利妥昔单抗治疗无反应，最初有反应的患者最终会对进一步的利妥昔单抗治疗产生耐药性。可能无法克服对 ADCC 的抵抗力，因为这种抵抗力可能是由患者的内在免疫特征引起的。因此，目前的方法主要集中在提高利妥昔单抗介导的 CDC 的功效，包括使用组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素 A或合成的 CpG 寡脱氧核苷酸上调 CD20 表达，以及使用修饰的单克隆抗体或细菌毒素衍生的 ILYd4。然而，在实验系统中观察到的这些影响需要进一步仔细研究，包括对其毒性的评估。

　　尽管利妥昔单抗对淋巴细胞的直接诱导细胞毒性作用有些争议，但对各种 NHL 细胞的大量研究表明，利妥昔单抗缺乏促凋亡能力。已经实施了一些策略，通过与其他药物组合以增加促凋亡作用来提高利妥昔单抗治疗的敏感性。这些额外的药物包括大分子，例如靶向 TRAIL-R1的人源化单克隆 mapatumumab 、基因工程融合蛋白 scFvRit:sFasL、Apo2 配体 (Apo2L)/TRAIL (dulanermin)和抗 CD20-白介素，和小分子，例如选择性 NEDD8 激活酶抑制剂 pevonedistat (MLN4924)、mTOR（雷帕霉素的哺乳动物靶点）抑制剂西罗莫司和蛋白酶体抑制剂硼替佐米。然而，这些药物的功效需要进一步确认，或者根据临床试验被认为是不充分的。有趣的是，obinutuzumab (GA101) 是一种新型 II 型乙二醇工程人源化单克隆抗 CD20 IgG1 抗体，由于增强诱导直接细胞死亡和 ADCC 的能力，尽管在介导 CDC59方面的效力较低.此外，在对利妥昔单抗敏感/耐药的 BL 中也观察到了 obinutuzumab 与利妥昔单抗相似的优越疗效。尽管 obinutuzumab 能够诱导强烈的直接细胞死亡的潜在机制在很大程度上仍不清楚，但已怀疑有几种介质，包括活性氧、BCR（B 细胞抗原受体）或细胞毒性途径。因此，在obinutuzumab中加入midostaurin是否能增强抗肿瘤活性值得进一步研究。在此，我们报道了midostaurin 通过抑制BL 细胞中的PKC 促进细胞凋亡来强烈增强利妥昔单抗的活性。

　　雷德帕斯（midostaurin）由星形孢菌素修饰，以提高对 PKC 的选择性，然后进一步发现与雷德帕斯代谢物一起抑制其他激酶，例如 FLT3、PDGFR、KIT 和 VEGFR2在 I 期临床试验中发现米多司林作为慢性口服治疗是安全和可耐受的，并根据其有效性获得 FDA（食品和药物管理局）的批准。考虑到 PKC 在耐药 BL 细胞中高度磷酸化，我们测试了雷德帕斯在原始和耐药 BL 细胞中增强利妥昔单抗抗肿瘤活性的体外和体内作用。我们发现雷德帕斯通过促进细胞凋亡（可能通过改变下游信号分子（包括 Bad、Bcl-2 和 NF-κB）的磷酸化）强烈增强利妥昔单抗的细胞毒性，尤其是在耐药 BL 细胞中。我们的研究结果支持在复发/难治性 BL 患者中单独或联合利妥昔单抗以及联合或不联合短期强化化疗的临床试验中进一步评估。

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