瑞戈非尼(regorafenib)治疗肺动脉高压的潜力

　　肺动脉高压 (PH) 的特征是平均动脉压逐渐升高，随后出现右心室衰竭和死亡。先前的研究表明，许多受体酪氨酸激酶信号传导抑制剂可能对治疗 PH 有益或有害。在这里，我们研究了多激酶抑制剂瑞戈非尼（regorafenib）治疗 PH 的治疗潜力。使用 PamStation®进行基于肽的激酶活性测定12个平台。5-溴-2'-脱氧尿苷增殖和跨孔迁移测定用于肺动脉平滑肌细胞（PASMC）。瑞戈非尼分别用于大鼠和小鼠的野百合碱和缺氧诱导的 PH。通过血流动力学和超声心动图测量分析功能参数。激酶活性测定揭示了特发性 PAH (IPAH) 患者 PASMC 中 29 种激酶的上调，其中 15 种被确定为瑞戈非尼的潜在靶标。与对照 PASMC 相比，瑞戈非尼在 IPAH-PASMC 中显示出强烈的抗增殖和抗迁移作用。两种实验模型均表明瑞戈非尼治疗后心脏功能得到改善，肺血管重塑减少。在野百合碱 (MCT) 大鼠的肺中，regorafenib 降低了 c-Jun N 末端激酶和细胞外信号调节激酶 1/2 的磷酸化。总体而言，我们的数据表明，瑞戈非尼在实验性 PH 中起着有益的作用。

　　瑞戈非尼（regorafenib）是一种多激酶抑制剂，经美国食品药品监督管理局 (FDA) 批准用于治疗晚期胃肠道间质瘤 (GIST) 和结直肠癌 (CRC) 。瑞戈非尼也被 FDA 批准为接受索拉非尼治疗的肝细胞癌 (HCC) 的二线治疗。瑞戈非尼靶向多种激酶的活性，包括 PDGFR-β、FGFR 1、血管内皮细胞衍生的生长因子受体 1-3 (VEGFR 1-3)、TEK 受体酪氨酸激酶-2 (TIE2)、盘状结构域受体酪氨酸激酶 2 (DDR2)、肝配蛋白 A 型受体 2 (Eph2A)、原癌基因，如 RET、KIT、C-RAF、B-RAF、蛋白酪氨酸激酶 5 (PTK5)、Abl 和丝裂原活化蛋白激酶 (MAPKs)，包括应激激活蛋白激酶/c-Jun N-末端激酶 (SAPK/JNK) 和 p38 MAPK。瑞戈非尼（regorafenib）对这些激酶的抑制作用是通过体外生化试验确定的。利用各种癌细胞系和癌症模型的体外和体内临床前研究以及临床研究确定了瑞戈非尼的抗增殖、抗迁移、抗血管生成和抗癌作用。本研究的目的是确定瑞戈非尼是否会对实验性 PH 中的心脏功能和肺血管重塑产生任何影响。

　　使用基于肽的激酶活性测定平台，我们发现几种激酶的活性，如酪氨酸激酶 (TKs) 和丝氨酸/苏氨酸激酶 (STKs) 在 PAH-PASMCs 中显着增强。有趣的是，在 PAH-PASMCs 中激活的激酶中有一半以上被多激酶抑制剂瑞戈非尼治疗所抑制。此外，我们证明了瑞戈非尼在来自供体个体和 IPAH 患者的人 PASMC 中表现出强大的抗增殖和抗迁移作用，对患病的 PASMC 具有更强的作用。这些发现与确立瑞戈非尼作为治疗性化合物用于治疗缺氧和非缺氧诱导的 PH 的数据相关。

　　多条证据表明，在 PH 中失调的许多信号通路通常是由各种 TK 和 STK 的激活驱动的。以前的报告表明，用小分子酪氨酸或多激酶抑制剂（TKI 或 MKI）靶向这些激酶可在实验性临床前 PH 模型和临床研究中提供功能改进。TKI 伊马替尼（Abl，试剂盒，PDGFR-β 拮抗剂）已证明在实验性 PH中的功能改善。其他靶向表皮生长因子受体 (EGFR) 的 TKI，如厄洛替尼、吉非替尼、拉帕替尼，在实验性 PH 中揭示了对心脏功能和血管重塑的有益影响。在临床前 PH 模型中研究的 MKI 索拉非尼或舒尼替尼提供了改善的血流动力学和重塑。尽管在实验性 PH 中，各种 TKI 和 MKI 对疾病进展表现出有益的影响，但假设大范围的抑制和缺乏特异性会在各种器官中引起意想不到的毒性。

　　在这项研究中，基于肽的筛选揭示了与供体 PASMC 相比，IPAH-PASMC 中 TK 和 STK 的激活与我们小组先前的报告不一致。瑞戈非尼（regorafenib）是一种口服多靶点酪氨酸激酶抑制剂，可抑制血管生成和致癌受体酪氨酸激酶，以及癌症中的 RAF/MEK/ERK 信号通路 。通过 PamGene 分析，在来自 IPAH 患者的人 PASMC 中用瑞戈非尼治疗揭示了一种实质性的激酶抑制模式。有趣的是，在 IPAH-PASMC 中激活的 29 种激酶中，15 种激酶被瑞戈非尼治疗抑制。其中，有几种丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs），包括细胞外信号调节激酶（ERK1 和 ERK2）、JUNN 末端激酶（JNK1、JNK2和JNK3）, 和 p38 delta据报道有助于 PAH 的病理生理学。此外，瑞戈非尼介导的细胞周期调节激酶抑制作用在疾病进展中起关键作用，如检查点激酶 1 (Chk1)、细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDK1 和 CDK2) 被注意到了。有趣的是，许多这些激酶，包括死亡相关蛋白激酶 3 (DAPK3) 之前在 PH 环境中进行了研究，而这些激酶的靶向在实验性 PH 中对心肺功能提供了有益的影响。Aurora B 激酶 (AurB) 是一种对细胞周期调节和有丝分裂很重要的丝氨酸/苏氨酸激酶。它在各种肿瘤中高度表达，包括乳腺癌、结肠直肠癌、肾癌、前列腺癌、非小细胞肺癌、KRAS 诱导的肺癌，并且靶向 AurB 激酶显示出对癌症进展的抑制作用。此外，抑制 PAH-PASMCs 中的叉头盒 M1 (FOXM1) 和 polo 样激酶 1 (PLK1) 等生长因子显着降低了细胞周期成分 AurB，表明靶向 AurB 激酶可能对治疗 PH 有益。抑制蛋白激酶 N1 (PKN1) 在主动脉血管平滑肌细胞和颈动脉球囊损伤 (BI) 模型中的血管重塑中显示出抗增殖和抗迁移作用。脾相关酪氨酸激酶 (SYK) 抑制剂 (BAY61-3606) 治疗降低了生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖和迁移。研究表明，人 B 淋巴细胞激酶 (BLK) 的活性形式是一种原癌基因，使用抑制剂靶向它在皮肤 T 细胞淋巴瘤 (CTCL) 中显示出抗增殖作用。这些研究表明 AurB、PKN1、BLK 和 SYK 激酶具有促增殖和促迁移特征，这是 PH 发病机制的标志。进一步研究这些激酶在 PH 中的直接作用将很有趣。

　　越来越多的数据表明 MAPK 信号激酶（包括 ERK 和 JNK）的激活发生在实验性 PH 中，并且这些激酶的活性降低遵循 PH 的治疗靶向。与此一致，从瑞戈非尼（regorafenib）治疗的 MCT 大鼠获得的肺匀浆显示 ERK 和 JNK 的磷酸化降低，这与从 PamGene 分析获得的瑞戈非尼治疗的 IPAH-PASMC 中的活性相当。目前研究的一个局限是瑞戈非尼的作用尚未在健康对照组动物中确定。多条证据表明，瑞戈非尼会引起危及生命的心脏毒性，包括高血压和心脏缺血/梗塞，这些影响可能与线粒体损伤有关。因此，瑞戈非尼长期给药可能会导致心脏毒性作用，最终可能导致右心室功能受损。两份病例报告表明，瑞戈非尼在一名 72 岁的转移性 GIST患者心房颤动期间诱导心肌损伤，并在一名 13 岁的复发性骨肉瘤患者中引起充血性心力衰竭。瑞戈非尼的心血管毒性也被描述为实体瘤患者 。此外，由于 25.6% 的晚期 CRC、HCC 和 GIST 患者无法耐受，因此该 TKI 的毒性和不耐受性导致瑞格非尼治疗中断。因此，有必要充分了解未来瑞戈非尼的心血管不良事件和潜在的心功能不全。总之，我们的数据表明，多激酶抑制剂瑞戈非尼（regorafenib）虽然有很大的预防措施，但可以被认为是一种新的治疗选择或作为预先存在的 PH/PAH 药物的潜在佐剂。

　　总之，我们的数据表明，多激酶抑制剂瑞戈非尼（regorafenib）虽然有很大的预防措施，但可以被认为是一种新的治疗选择或作为预先存在的 PH/PAH 药物的潜在佐剂。微信扫描下方二维码了解更多：