来那度胺/雷利度胺在浆细胞分化过程中的不同作用

　　沙利度胺、来那度胺（雷利度胺）和泊马度胺大大改善了多发性骨髓瘤患者的预后。然而，它们对浆细胞（骨髓瘤细胞的健康对应物）的影响尚不清楚。在这里，我们使用体外研究了来那度胺对正常人浆细胞生成的影响模型。来那度胺抑制前浆母细胞和早期浆细胞的产生，同时适度影响浆母细胞的产生。它还降低了 Ikaros、Aiolos 和 IRF4 转录因子在浆母细胞和早期浆细胞中的表达水平。这表明他们对来那度胺的不同敏感性不是由于 Ikaros 或 Aiolos 降解的差异。来那度胺还抑制长寿命浆细胞生成，但一旦生成并不会影响其长期存活。最后的观察结果与来那度胺治疗 3-18 个月不影响多发性骨髓瘤同种异体移植患者的骨髓健康浆细胞计数的发现一致。

　　本研究的主要成果可归纳为四点：

　　来那度胺（雷利度胺）可减少高度增殖的前浆母细胞的产生

　　我们和其他人已经表明，MBCs 分化为 prePBs，然后是 PBs 是一个需要多次细胞分裂的过程。同意，在这里我们发现 prePBs 正在积极循环（45% 的 prePBs 处于 S 期）。来那度胺通过降低 S 期 prePB 的百分比和增加 G1 中的分数而不影响其活力来损害 prePB 的形成。这与来那度胺在肿瘤细胞系中诱导细胞周期抑制剂 p21WAF1和 p27KIP1的能力一致，特别是通过促进p21WAF1基因启动子的去甲基化。

　　来那度胺对 PB 形成影响不大，但显着抑制早期 PC 的产生

　　来那度胺（雷利度胺）以 0.76 μM 的估计 50% 抑制浓度降低了早期 PC 计数，与抑制 prePB 形成的浓度相似。相反，来那度胺仅在高出 10 倍的浓度时才开始影响 PB 的产生，并且不损害其细胞周期。早期的 PC 比 PB 更具差异化。它们是循环不良的细胞，表达更多的细胞质 Igs，缺乏膜 Igs（PBs 仍然表达少量的膜 Igs）并强烈表达 CD27 和 CD138（syndecan-1）。来那度胺的主要靶点是 Ikaros 和 Aiolos 转录因子。然而，增殖的 PB 和增殖不良的早期 PC 对来那度胺的敏感性存在 10 倍差异，这不能通过这两种细胞类型中 Ikaros 和 Aiolos 表达的差异来解释。或者，来那度胺在早期 PC 中比在 PB 中更有效地降解 Ikaros 或 Aiolos。当这些细胞与 10 μM 来那度胺（两种细胞类型减少 60% 至 80%）一起孵育时，情况并非如此。然而，我们不能排除当使用较低的来那度胺浓度时，这些转录因子在早期 PC 中可能比在 PB 中更有效地降解。我们无法充分研究这一点，因为难以获得足够的细胞来通过蛋白质印迹在不同时间点以及在与不同浓度的来那度胺孵育时评估蛋白质表达。而且，体外产生的细胞群，可能是由于这些细胞中这些蛋白质的弱表达。然而，当更有效的抗体可用时，应进一步研究这一点。

　　在骨髓瘤细胞中，IRF4 是启动浆细胞分化的主要转录因子，Ikaros 和 Aiolos 控制 IRF4 基因表达。由于 Ikaros 和 Aiolos 的降解，来那度胺还负向调节 IRF4 表达。一致地，我们发现来那度胺在活化的 B 细胞、prePB、PB 和早期 PC 中以剂量依赖性方式降解 IRF4。IRF4 在早期 PC 中的降解比在用低剂量来那度胺（即 0.01 μM 和 0.1 μM）处理的 PB 中更明显，但与更高剂量（1 和 10 μM）相当。在培养的第 10 天，细胞活力显着下降，主要影响早期 PC。IRF4 表达对 PC 生存至关重要，因此我们可以假设在高剂量来那度胺下存活的早期 PC 是根据高 IRF4 表达选择的那些。这可以解释在 10 μM 来那度胺浓度下，早期 PC 和 PB 之间 IRF4 表达没有显着差异。来那度胺诱导的正常 PB 和 PC 中的 IRF4 降解不如 OPM2 骨髓瘤细胞明显，这可能是因为 IRF4 表达在骨髓瘤细胞中通过异常 MYC 表达的连续触发而失调。

　　来那度胺（雷利度胺）在体外有效地靶向从早期 PC 生成长寿命 PC

　　来那度胺（雷利度胺）抑制从纯化的早期 PC 开始生成 LLPC，IC50低于 1 μM，该浓度在抑制 prePB 或早期 PC 生成的范围内。Cocco 等人最近记录了在体外产生 LLPC 的能力。并由我们的小组。我们的结果与 Aiolos 缺陷小鼠的表型非常吻合。事实上，它们不能生成长时间产生 Igs 的 PC。由于来那度胺专门针对 Ikaros 和 Aiolos，这些在体内和体外（我们的研究）研究结果表明，Aiolos 和/或 Ikaros 对于从早期 PC 生成 LLPC 至关重要。在目前的研究中，由于可用于蛋白质印迹分析的 LLPC 数量太有限，我们无法确定 LLPC 中的 Ikaros 和 Aiolos 表达。事实上，由于早期 PC 和 LLPC 生成步骤中发生的高细胞损失（80% 的分化细胞将死亡） ，因此只能生成少数 LLPC。此外，虽然之前在骨髓瘤细胞系中报道了通过 FACS 进行 Ikaros 和 Aiolos 免疫检测，但我们没有在 PB 或早期 PC 中获得特异性标记，因此不能在 LLPC 中使用这种方法（结果未显示）。

　　一旦产生 LLPC，来那度胺（雷利度胺）不会影响其长期存活和 Ig 生产

　　从早期 PC体外生成 LLPC 是一个高度选择性的过程，但一旦生成 LLPC，它们可以在体外有效存活数月。目前的数据表明，在我们的体外分化系统中，Ikaros 和 Aiolos 对于 LLPC 的存活并不是必需的。此外，LLPC 的存活率也可能不受体内来那度胺的影响.事实上，在接受干细胞移植的 MM 患者中，在检测到残留肿瘤细胞后 3 至 18 个月的来那度胺治疗不会影响通过流式细胞术鉴定的正常 BM PC 的平均计数。这些数据表明，Ikaros 和/或 Aiolos 对于人类 LLPC在体外和体内的长期存活是可有可无的。研究来那度胺治疗患者的 MBCs、prePBs、PBs 和 PCs 的变化应该很有趣。

　　总之，这项研究表明，来那度胺（雷利度胺）对人类 PBs 的形成影响最小，特别针对 MBCs 的 prePBs、PBs 的早期 PCs 和早期 PCs 的 LLPCs 的生成，并且不会改变 LLPCs 一旦生成，同意来那度胺治疗的患者对正常 BM PCs 缺乏影响。由于来那度胺特异性靶向 Ikaros 和 Aiolos 蛋白，这些数据表明这些转录因子在调节人类早期 PC 和 LLPC 的生成中起主要作用。微信扫描下方二维码了解更多：