特罗凯/厄洛替尼在NSCLC中的靶点

　　EGFR靶向癌症治疗是非小细胞癌的一个突破。miRNA已被证明在癌症中发挥重要作用。目前，对于 miRNA 在 EGFR 靶向癌症治疗中的作用尚不清楚。在这项研究中，我们首先发现特罗凯/厄洛替尼降低了 miR-9 的表达。与外周正常组织相比，人肺癌组织中miR-9的表达增加，miR-9促进NSCLC细胞的生长。miR-9的过表达降低了厄洛替尼的生长抑制作用。其次，miR-9 通过直接抑制其 mRNA 翻译来降低 FoxO1 的表达。腺病毒介导的 FoxO1 过表达或 siRNA 介导的 FoxO1 下调负调控细胞生长。外源性过表达 FoxO1 降低了 miR-9 的促生长作用。最后，我们发现厄洛替尼上调了 FoxO1 蛋白的表达。此外，miR-9的过表达降低了厄洛替尼诱导的FoxO1表达，而FoxO1的过表达增强了厄洛替尼的生长抑制作用。此外，我们发现厄洛替尼通过抑制 miR-9-1 的转录来下调 miR-9 的表达，并且可能与增强的 DNA 甲基化有关。这些发现表明，致癌 miR-9 靶向 FoxO1 以促进细胞生长，并且该轴的下调与厄洛替尼的生长抑制作用有关。阐明厄洛替尼对 miRNA 的调节可能表明增强 EGFR 靶向癌症治疗的新策略。此外，我们发现厄洛替尼通过抑制 miR-9-1 的转录来下调 miR-9 的表达，并且可能与增强的 DNA 甲基化有关。这些发现表明，致癌 miR-9 靶向 FoxO1 以促进细胞生长，并且该轴的下调与厄洛替尼的生长抑制作用有关。阐明厄洛替尼对 miRNA 的调节可能表明增强 EGFR 靶向癌症治疗的新策略。此外，我们发现厄洛替尼通过抑制 miR-9-1 的转录来下调 miR-9 的表达，并且可能与增强的 DNA 甲基化有关。这些发现表明，致癌 miR-9 靶向 FoxO1 以促进细胞生长，并且该轴的下调与厄洛替尼的生长抑制作用有关。阐明厄洛替尼对 miRNA 的调节可能表明增强 EGFR 靶向癌症治疗的新策略。

　　在这项研究中，我们定义了 miR-9 在肺癌中的致癌作用。首先，我们检测到与外周正常组织相比，19/20 人 NSCLC 组织中 miR-9 表达增加。其次，通过转染外源合成的 miR-9 瞬时过表达 miR-9，或通过建立稳定的细胞系永久过表达，促进了 NSCLC 细胞的生长。尽管合成的 miR-9 抑制剂的瞬时转染仅轻微抑制细胞生长，但具有下调 miR-9 的稳定细胞系比对照细胞生长缓慢。这些数据表明 miR-9 在 NSCLC 中具有致癌性。已在几种类型的人类癌症组织中检测到异常的 miR-9 表达。胃癌，子宫内膜，脑癌，白血病，观察到 miR-9 上调和致癌，而在宫颈癌、结肠直肠癌和卵巢癌中观察到下调和抗肿瘤。海勒等人。据报道，在非小细胞癌中，基于全基因组 miRNA 表达谱，miR-9 表达下调。原发性 miR-9-3 的 DNA 高甲基化解释了成熟 miR-9 的下调。我们的观察结果与他们的发现不一致，这可能是由于从不同疾病阶段的患者中选择的组织样本所致。我们收集了手术患者的组织样本，因此他们中的大多数人处于疾病的早期阶段。然而，我们关于 miR-9 促进 A549 细胞生长的结果表明 miR-9 在 NSCLC 中是致癌的。最近，随着我们对 miRNA 的进一步了解，人们认识到相同的 miRNA 在不同的癌症亚型、疾病的不同阶段或化疗的不同步骤中可能发挥相反的作用。因此，我们的研究结果表明 miR-9 至少在一些肺癌患者中是一种癌基因，并且可能在早期阶段。

　　基于我们的发现，我们还将 miR-9 确定为特罗凯/厄洛替尼的新靶点：（1）厄洛替尼下调了几种 NSCLC 细胞中 miR-9 的表达；(2) miR-9的过表达降低了厄洛替尼的生长抑制作用。由于厄洛替尼主要阻断 EGFR，我们检测了厄洛替尼在含有野生型 EGFR 的 A549 细胞和含有 EGFR 的活性突变形式的 HCC827 细胞中对 miR-9 的调节，我们的研究结果表明这是一种常见现象。然而，miR-9过表达仅部分逆转了厄洛替尼的抗生长作用，这表明miR-9表达的下调是厄洛替尼除EGFR抑制之外的机制之一，或者是EGFR抑制的结果。迈亚特等人。据报道，2-8 个 miRNA 的同时过表达恢复，而单个 miRNA 的过表达没有改变，FoxO1 在子宫内膜癌中的表达。因此，也有可能许多miRNA位于EGFR下游并参与厄洛替尼的抗癌作用，因此单个miRNA的过表达不足以逆转厄洛替尼的作用。因此，除 miR-9 外，其他 microRNA 值得进一步研究。

　　miRNA通过在转录后水平调节多个基因表达发挥作用。几种对癌症发展至关重要的分子已被报道为 miR-9 的直接下游靶标。在胃癌中，miR-9 靶向 CDX2（尾部相关同源框）以促进细胞增殖。在卵巢癌中，miR-9 靶向 NF-κB 以抑制细胞生长。在白血病中，miR-9 靶向 FoxOs（FoxO1 和 FoxO3）以促进细胞分化。在乳腺癌中，miR-9 靶向 E-cadherin 以促进 EMT（表皮-间质转化）和转移。此外，通过TargetScan、Pictar等软件预测的miR-9靶基因也多得多。在这项研究中，我们基于荧光素酶报告基因分析确定了肿瘤抑制因子 - FoxO1 作为 miR-9 的直接下游靶标，这与 miR-9 在 NSCLC 中的致癌性相一致。我们还揭示了 miR-9 通过抑制 FoxO1 翻译而不是 mRNA 降解发挥作用，这是基于我们的发现，即 miR-9 降低了蛋白质水平，但不降低 FoxO1 的 mRNA 水平。为了进一步证实这一发现，我们检测了相同样本中的 NF-κB mRNA 水平，因为已经证明 NF-κB 在 mRNA 水平上受 miR-9 的调节。NF-κB mRNA受miR-9负调控的结果表明miR-9表达成功并且在我们的实验系统中起作用。而且，位于 FoxO1 mRNA 不同区域的另外三对 FoxO1 引物用于进一步检查 FoxO1 mRNA 的表达。结果显示 FoxO1 mRNA 也不受 miR-9 的调节。此外，FoxO1 的 3'UTR 区域中只有 7 个碱基与 miR-9 的种子区域匹配，这种不完全匹配在理论上表明翻译抑制。在这项研究中，由于 miR-9 具有致癌性，我们预测在厄洛替尼治疗 NSCLC 中，miR-9 - 调节的肿瘤抑制基因 - FoxO1 比 miR-9 - 调节的致癌基因 NF-κB 起更重要的作用。

　　总之，目前的研究确定了 miR-9 调节的 FoxO1 表达在促进 NSCLC 中起重要作用，并且抑制该轴有助于特罗凯/厄洛替尼的抗癌功效。此外，厄洛替尼通过抑制初级 miR-9-1 转录来下调 miR-9 表达。我们的研究结果表明厄洛替尼的新机制和通过共同靶向 miRNA 增强 EGFR 靶向癌症治疗的新策略。微信扫描下方二维码了解更多：