克唑替尼(Crizotinib)抑制NF2相关神经鞘瘤

　　2 型神经纤维瘤病 (NF2) 是一种显性遗传的常染色体疾病，其特征是第 8 对脑神经鞘瘤的NF2在梅林肿瘤抑制基因编码，蛋白质牵连作为多个细胞信号传导途径的抑制。为了确定 NF2 相关恶性肿瘤的潜在药物靶点，我们评估了抑制酪氨酸激酶受体 MET 的后果。我们确定克唑替尼（Crizotinib）是一种 MET 和 ALK 抑制剂，是体外NF2-null 雪旺细胞增殖和体内肿瘤生长的有效抑制剂。为了确定克唑替尼的靶标，我们采用了基于活性的蛋白质分析 (ABPP)，从而将 FAK1 (PTK2) 确定为克唑替尼抑制的相关靶标NF2-null 神经鞘瘤细胞。随后的研究证实，抑制 FAK1 足以抑制 NF2 动物模型中的肿瘤发生，并且 FAK1 的克唑替尼抗性形式可以挽救治疗效果。这些研究确定了一种 FDA 批准的药物作为 NF2 的潜在治疗方法，并描述了在NF2缺失施万细胞中的作用机制。

　　尽管对 NF2 的分子基础进行了超过 2 年的研究，但仍然缺乏治疗选择。目前的治疗选择是抗症状的，仅限于放射或手术，并且与严重的发病率相关。在努力确定合适的治疗靶标，我们最初集中在MET酪氨酸激酶抑制剂，基于以前的报告暗示它作为一个潜在的目标。虽然我们的研究结果表明 MET 对NF2-null 施万细胞的增殖来说主要是可有可无的，但我们的努力确定克唑替尼（Crizotinib）在体外和体内都具有显着的抗增殖活性.克唑替尼被开发为间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 和 MET/肝细胞生长因子受体 (HGFR) 的 ATP 竞争性抑制剂。然而，它已被证明可以结合和抑制多个额外的目标，包括 ROS1 和 RON 受体酪氨酸激酶。

　　由于克唑替尼（Crizotinib）抑制的主要靶点似乎不在NF2缺失的施万细胞中表达，我们采用 ABPP 来鉴定 10 种似乎被克唑替尼显着抑制的激酶。尽管这些激酶中的任何一种，无论是单独的还是组合的，都有可能代表克唑替尼介导其抗肿瘤作用的靶点，但最近报道的 NF2 状态与对 FAK1 抑制的敏感性之间的关联使我们关注以 FAK1 作为潜在目标。此外，之前使用竞争结合方法评估抑制剂选择性/效力的报告已将克唑替尼确定为 FAK1 的有效抑制剂和基于集成网络的蜂窝特征的 HMS 库 PF02341066 KINOMEscan 数据集 20033）。我们工作中的多条证据表明 FAK1 确实是克唑替尼的相关靶点。首先，我们的数据证实，克唑替尼治疗会抑制 FAK1 的激活，这是由酪氨酸 397 的磷酸化所确定的，这与该激酶的激活相关。其次，用 FAK1 的小分子抑制剂处理NF2缺失的雪旺氏细胞导致以剂量依赖性方式抑制细胞增殖，模拟克唑替尼治疗的结果。第三，也是最重要的，直接抑制两个NF2 中的 FAK1-null Schwann 细胞系，使用 siRNA 或 shRNA，概括了用克唑替尼处理观察到的表型，并确认 FAK1 的缺失与这些细胞的增殖不相容。最后，克唑替尼抗性 FAK1 突变体改变和增加克唑替尼对 SC4 细胞的 EC50的能力表明，克唑替尼在这些细胞中的作用主要是通过 FAK1 抑制介导的。虽然这些研究不排除其他目标的可能贡献，但观察到的表型的程度和一致性表明 FAK1 的抑制是介导克唑替尼作用的主要机制。

　　从临床角度来看，克唑替尼（Crizotinib）是 NF2 评估的极好候选者。它具有良好的耐受性，并已获得 FDA 批准用于治疗激活 ALK 融合阳性的转移性非小细胞肺癌患者。此外，克唑替尼正在儿童复发/难治性实体瘤和原发性中枢神经系统肿瘤（如神经母细胞瘤）的I/II 期试验中进行评估。除了评估克唑替尼对 NF2 缺陷型神经鞘瘤的疗效外，克唑替尼对其他NF2应评估无效肿瘤，例如脑膜瘤和间皮瘤。虽然克唑替尼是作为 MET/ALK 抑制剂开发的，但有许多专门针对 FAK1 开发的抑制剂目前正处于临床试验的各个阶段。这些包括 GSK2256098、PND-1186 (VS-4718)、PF-271 (VS-6062) 和 defactinib (VS-6063)。一旦获得批准，这些药物可能代表NF2 的额外治疗选择-null 肿瘤，因此应进行评估。有趣的是，我们对 PND-1186 和 defactinib 的研究表明，与克唑替尼相比，这些药物具有相似的效力。这表明克唑替尼对 FAK1 的抑制能力足以引起有利的作用。然而，这些药物的真正比较最终需要在临床试验环境中进行评估。

　　总之，我们的研究确定了 FDA 批准的药物克唑替尼（Crizotinib），该药物在体外和体内均显示出对抗NF2-null 神经鞘瘤的功效。此外，我们的研究通过抑制 FAK1 确定了作用机制。鉴于 NF2 缺乏治疗选择以及该药物的良好耐受性，克唑替尼代表了对患有 NF2 缺陷型肿瘤的患者进行临床测试的极好候选药物。微信扫描下方二维码了解更多：