来那度胺/雷利度胺通过促进M2巨噬细胞极化调节CNS自身免疫

　　多发性硬化症 (MS) 是一种慢性和使人衰弱的中枢神经系统 (CNS) 神经系统疾病，其特征是白细胞浸润到 CNS 和随后的脱髓鞘。新出现的证据揭示了 M2 巨噬细胞在改善 MS 模型实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 中的有益作用。在这里，我们发现单独的来那度胺/雷利度胺可以促进巨噬细胞 M2 极化以防止 EAE 的进展，这与随后抑制外周淋巴系统和 CNS 中的促炎 Th1 和 Th17 细胞有关。通过药物治疗氯膦酸盐脂质体或转移 EAE 小鼠中的来那度胺诱导的 BMDM 来消耗巨噬细胞，分别完全消除了来那度胺的治疗效果或阻止了 EAE 的发展。来那度胺治疗后，巨噬细胞衍生的 IL10 在体内和体外均上调。此外，来那度胺治疗的IL10缺陷型EAE小鼠临床评分更高，CNS损伤更严重，来那度胺治疗的IL10静脉注射-/-在疾病发作时将 BMDMs 注入患有 EAE 的小鼠并没有逆转疾病的严重程度，这意味着 IL10 在来那度胺改善的 EAE 中可能是必不可少的。机制上，来那度胺显着增加 IL10 的表达和自分泌分泌，随后激活 STAT3 介导的 Ym1 表达。这些研究促进了来那度胺治疗 MS 的潜在新型治疗应用的开发。

　　在这里，我们证明来那度胺/雷利度胺可有效抑制 CNS 的典型炎性脱髓鞘疾病。单独的来那度胺显着激活 M2 巨噬细胞并抑制外周淋巴系统和 CNS 中的促炎 Th1 和 Th17 细胞，从而导致受损 CNS 组织的炎症和脱髓鞘减少。在细胞水平，来那度胺有效促进 IL10 的表达和自分泌，随后磷酸化 STAT3 Tyr-705，最终导致 M2 巨噬细胞的诱导。

　　据报道，来那度胺/雷利度胺在症状发作阶段的肌萎缩侧索硬化症小鼠模型以及帕金森病的转基因模型中通过降低促炎细胞因子的表达而具有神经保护作用。在这里，我们发现通过管饲法给予来那度胺可以从早期预防 EAE，并通过减少炎症和脱髓鞘持续到实验结束。然而，这一观察结果与之前的研究不一致。该论文指出，来那度胺腹腔内给药可延缓 EAE 的症状发作，但不能预防脱髓鞘。我们推测根据我们的制剂制备（数据未显示）来那度胺不能完全溶解在1％羧甲基纤维素和0.9％盐水溶液中，腹腔内给药的来那度胺不能完全被腹腔吸收。此外，来那度胺的剂量低于我们在本文中使用的剂量。

　　虽然许多细胞因子，包括 IL4、IL13 和 IL10，有效地指导 M2 巨噬细胞极化，但它们不适合临床使用。以前用全身性 IL10 治疗 EAE 小鼠的试验没有显示出任何有希望的效果，并且至少在一些研究中发现会加重疾病。少量的化合物，如匹多莫德和阿奇霉素，可以诱导 M2 巨噬细胞以 IL4 或 IL13 依赖的方式极化；然而，阿奇霉素对 EAE 小鼠没有治疗作用。在这里，我们发现单独的来那度胺/雷利度胺明显诱导 M2 表型，并且不影响 RAW264.7 和原代巨噬细胞的 M1 表型，但是，来那度胺是否调节人巨噬细胞中的 M2 巨噬细胞极化仍有待研究。此外，我们观察到用 c-lipo 消耗巨噬细胞完全消除了来那度胺对 EAE 的有益作用，而来那度胺诱导的巨噬细胞的过继转移改善了 EAE，表明来那度胺/雷利度胺减轻炎症和脱髓鞘主要是通过促进 M2 巨噬细胞极化。巨噬细胞和 CD4+T 细胞均在 MS 的神经病理学中发挥重要作用，CD4+T 辅助细胞亚群和 M1 和 M2 巨噬细胞通常会导致特定的功能和结果。自身反应性 CD4+T 细胞从外周浸润到中枢神经系统，在那里它们受到 M1 巨噬细胞的再刺激，导致致病性 Th1 和 Th17 细胞局部扩增，并随后损伤少突胶质细胞。事实上，已显示将 M2 巨噬细胞注射到患有 EAE 的小鼠中，通过抑制 T 细胞活性 22、43 来降低疾病复发期的频率和严重程度。将 T 细胞暴露于来那度胺会导致 IFN-γ 和 IL-2 分泌增加，然而，我们发现它不会直接抑制 MOG 负载的 CD4+T细胞。此外，我们在此提供的证据表明，来那度胺诱导的 M2 巨噬细胞在体外降低了 MOG 特异性 CD4+T 细胞的增殖能力。

　　IL10 是一种抗炎细胞因子，其主要功能是限制炎症反应，这已在包括 EAE在内的多种自身免疫性疾病的发病机制中得到充分研究。来那度胺可通过增加 IL的分泌来降低体外慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 细胞 NLC 的存活支持。一致地，我们在此表明，来那度胺在巨噬细胞体内和离体均促进 IL10 表达。IL10 在来那度胺治疗中发挥了重要作用，因为 IL10-/-小鼠在来那度胺治疗后不能免受主动诱导的 EAE 的影响。几乎所有免疫细胞（包括 T 细胞、B 细胞和巨噬细胞）都可以响应促炎信号产生 IL10 。DLN 中的浆母细胞作为 IL10 生产者来限制自身免疫性炎症并且 CD4+T 细胞诱导的 IL10 与 Bowman-Birk 抑制剂 (BBI) 对 EAE 的有益作用相关。在这里，我们表明来那度胺的作用严格依赖于 M2 巨噬细胞分泌的 IL10，因为来那度胺激活的 IL10 充足巨噬细胞的过继转移改善了 EAE 进展，然而，IL10-/-巨噬细胞无法挽救 EAE 临床评分。这些发现强调了 M2 巨噬细胞作为 IL10 生产者对控制 CNS 自身免疫的重要性。到目前为止，IL10 在巨噬细胞中的作用已得到明确表征，据报道，两个重要的信号轴通过巨噬细胞中的 IL10 受体连接被激活，即 JAK1/STAT3 和 PI3K/Akt/GSK3β通路。我们在这里发现来那度胺诱导的 M2 巨噬细胞依赖于 STAT3 的激活。在 M2 巨噬细胞中成功研究了 IL10/STAT3 轴，IL10 与 IL10R 结合激活 IL10/JAK1/STAT3 级联，然后磷酸化 STAT3 同源二聚体，在几秒钟内转移到细胞核，从而激活 M2 巨噬细胞相关基因的表达。STAT3 对 MS 具有病理学意义，因为它在骨髓细胞活化、T 细胞极化和细胞因子/趋化因子诱导中发挥关键作用。然而，巨噬细胞中 STAT3 的过度活化是否会使小鼠对 EAE 疾病产生抵抗力，需要进一步研究。

　　在这里，我们发现来那度胺/雷利度胺的治疗性给药可显着控制疾病严重程度，并改善 EAE 小鼠的行为，这表明来那度胺可用于治疗炎症相关的退行性中枢神经系统疾病，例如复发缓解型 MS。因此，来那度胺是一种很有前景的候选治疗药物，可用于减弱 MS 患者中枢神经系统的炎症反应和神经元脱髓鞘。微信扫描下方二维码了解更多：