吉非替尼(Gefitinib)耐药性NSCLC的治疗靶点

　　表皮生长因子受体的体细胞突变通常会导致对非小细胞肺癌 (NSCLC) 酪氨酸激酶抑制剂治疗产生耐药性。在本研究中，我们旨在确定可在 NSCLC 细胞中与吉非替尼（Gefitinib）联合诱导细胞死亡的伙伴药物和途径。我们进行了全基因组 RNAi 筛选，以确定吉非替尼在酪氨酸激酶抑制剂耐药细胞中的合成致死率。筛选数据用于不同的方法。首先，我们确定PRKCSH作为候选基因，其沉默诱导吉非替尼处理的 NSCLC 细胞凋亡。接下来，在一个计算机中shRNA 文库数据的基因特征通路分析，观察到参与 CD27 信号级联的基因的强相关性。我们发现达沙替尼（NF-κB 通路抑制剂）与吉非替尼的组合协同抑制了 NSCLC 细胞的生长。最后，利用连通图，硫利达嗪被确定为顶级药物扰动剂。在我们的实验中，它与吉非替尼（Gefitinib）协同降低 p-Akt 水平并诱导 NSCLC 细胞凋亡。总之，一个汇集的短发夹库筛选确定了几个潜在的途径和药物，可以作为吉非替尼耐药性 NSCLC 的治疗靶点。

　　几乎所有具有 EGFR 外显子 19 或 21 突变的新诊断 NSCLC 患者对 TKI 治疗都有初始反应。然而，总是在 6-12 个月后，肿瘤对治疗产生耐药性，这与额外的基因组变化有关，尤其是 T790M EGFR 突变。与 HIV 治疗的经验教训类似，用一种以上的药物治疗这些非小细胞肺癌可能会阻止耐药克隆的出现。因此，我们在 NSCLC 细胞中使用汇集的短发夹 RNA 文库对吉非替尼进行了合成致死率筛选，以帮助确定 TKI 耐药性 NSCLC 中可成药的途径。此外，shRNA 文库数据用于吉非替尼相关通路分析和基于计算机基因签名的检查。

　　从 shRNA 文库筛选和 NSCLC 细胞中的 siRNA 验证实验中，我们鉴定并验证了PRKCSH作为与吉非替尼（Gefitinib）协同作用的候选基因。PRKCSH编码葡萄糖苷酶 II (GIIβ) 的非催化 β-亚基。葡萄糖苷酶 II 促进内质网 (ER) 的蛋白质易位和“质量控制”途径。此基因的突变与常染色体显性多囊性肝病（PCLD）相关联的。NSCLC 细胞中PRKCSH 的沉默导致细胞增殖降低和凋亡细胞比例增加，当与吉非替尼联合使用时，这两种效果都显着增强。PRKCSH 的鉴定引导我们检查PKD2。这两种分子都参与常染色体显性遗传性多囊肾和肝病，PRKCSH作为伴侣样分子调节PKD2 的表达。PKD2通过降低内质网 (ER) 中的 Ca2+浓度来控制内质网 (ER) 调节的 Ca2+介导的细胞凋亡。当与吉非替尼组合时，NSCLC 细胞中PKD2 的沉默增强了细胞凋亡。此外，PKD2敲低抑制了与细胞存活相关的 ERK 通路的激活。据我们所知，PRKCSH和PKD2都没有被报道为 NSCLC 的治疗靶点。使用任一PRKCSH或PKD2组合抑制剂吉非替尼治疗非小细胞肺癌，需要进一步研究。

　　我们的 shRNA 文库筛选还鉴定了与 NF-κB 激活和促存活信号相关的 CD27 信号通路。达沙替尼可以调节 NF-κB 通路；但单独使用该药物对非小细胞肺癌的细胞凋亡或增殖几乎没有影响。然而，达沙替尼和吉非替尼的组合协同诱导细胞死亡并抑制细胞生长。总之，这些实验表明 NF-κB 抑制剂和吉非替尼的组合可能对 EGFR 突变的 NSCLC 有治疗效果。

　　总之，shRNA 文库筛选确定了吉非替尼（Gefitinib）治疗 EGFR 突变 NSCLC 包括 EGFR T790M 的治疗伙伴。此外，shRNA 文库数据用于基于基因签名的计算机内查询，将PRKCSH确定为吉非替尼的有趣合作伙伴。最后，shRNA 结果用于查询连接图。该通路分析将硫利达嗪确定为吉非替尼的协同合作伙伴。总之，这项使用多种实验方法的研究已经确定了令人兴奋的药物和途径，可用于在 EGFR 突变 NSCLC 中进行进一步研究。微信扫描下方二维码了解更多：