克唑替尼(Crizotinib)耐药能吃卡博替尼吗

　　ROS1重排导致组成型 ROS1 激活，并具有有效的转化活性。在正在进行的 1 期试验中，ALK 酪氨酸激酶抑制剂 (TKI)克唑替尼（Crizotinib）在具有ROS1融合的非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者中显示出显着的初始反应；然而，由于ROS1中的G2032R等获得性突变，癌症最终会产生克唑替尼耐药性。因此，需要了解ROS1重排 NSCLC中的克唑替尼耐药机制并确定克服耐药性的治疗策略。

　　实验设计

　　检查了 CD74-ROS1 转化的 Ba/F3 细胞对多种 ALK 抑制剂的敏感性。通过用 Ba/F3 细胞进行 N-乙基-N-亚硝基脲诱变筛选 CD74-ROS1 融合中获得的 ROS1 抑制剂抗性突变。为了克服耐药突变，我们使用临床实践中使用或目前正在临床试验中测试的小分子抑制剂和抗癌药物进行了高通量药物筛选。在 CD74-ROS1 突变 Ba/F3 细胞和含有 G2032R 突变 CD74-ROS1 的克唑替尼耐药患者来源癌细胞 (MGH047) 中评估了鉴定药物的作用。

　　结果

　　我们在 ROS1 激酶域中发现了多个新的克唑替尼（Crizotinib）耐药突变，包括 G2032R 突变。作为高通量药物筛选的结果，我们发现 cMET/RET/VEGFR 抑制剂卡博替尼 (XL184) 有效抑制 CD74-ROS1-WT 和携带 Ba/F3 和 MGH047 细胞的耐药突变体的存活。此外，卡博替尼可以克服所有新发现的二级突变的所有耐药性。

　　结论

　　我们在具有ROS1重排的NSCLC 中开发了对 ROS1 抑制剂获得性耐药的综合模型，并将卡博替尼确定为克服耐药性的治疗策略。

　　最近，cMET/ALK/ROS1 抑制剂克唑替尼（Crizotinib）已被临床评估用于治疗 ROS1 重排的 NSCLC，并显示出显着的活性。由于 ROS1 和 ALK 激酶结构域之间的相似性，我们检查了各种 ALK 抑制剂对 CD74-ROS1 融合的敏感性，发现除艾乐替尼外，所有测试的 ALK 抑制剂均有效抑制 ROS1 融合。在这些 ALK 抑制剂中，色瑞替尼最近被美国 FDA 批准用于克唑替尼耐药或克唑替尼不耐受疾病的 ALK 阳性患者，因为在 I 期研究中观察到克唑替尼耐药疾病的高反应率。色瑞替尼也被证明在 WT 和看门人突变的 ALK (L1196M) 中都有活性，这会导致克唑替尼耐药。在对 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂产生耐药性的EGFR突变阳性肺癌中，大约有一半的病例检测到继发性 T790M 看门人突变。相比之下，在克唑替尼耐药的 ALK 阳性肺癌中，在各种细胞系和克唑替尼耐药患者中发现了多种类型的 ALK 激酶结构域耐药突变。由于ALK和ROS1的酪氨酸激酶结构域具有约70%的同源性，因此ROS1重排的NSCLC中可能还会出现多种克唑替尼耐药突变。

　　为了前瞻性地确定影响 ALK/ROS1 抑制剂克唑替尼和色瑞替尼的耐药突变，我们在 CD74-ROS1 转化的 Ba/F3 细胞中进行了细胞耐药性筛选，并确定了几个耐药突变，包括 G2032R，作为赋予克唑替尼耐药性的最明显突变.迄今为止，仅在克唑替尼治疗的ROS1重排 NSCLC耐药患者中发现了 ROS1 中的 G2032R 突变。在本研究中，新发现的 L1982F、E1990G、F1994L 和 L2026M 耐药突变频率较低，对克唑替尼的耐药性较弱。此外，使用结构不同的 ALK/ROS1 抑制剂色瑞替尼进行的筛选显示突变谱略有不同；然而，最明显的耐药突变是 L1951R 和 G2032R。除了 ENU 诱导的加速诱变筛选外，我们还进行了饱和诱变筛选并鉴定出不同的独特突变（E2020K 和 P2021L），但未观察到 G2032R 突变（数据未显示）。同样，先前使用相同方法鉴定 EML4-ALK 中克唑替尼耐药突变的研究鉴定了独特的突变，但没有概括临床相关突变。这些结果表明，错配修复缺陷型大肠杆菌菌株中的诱导突变谱可能与哺乳动物细胞中的合理突变略有不同。然而，在携带 BCR-ABL 融合的 Ba/F3 细胞中使用伊马替尼进行的诱变筛选研究表明，饱和筛选试验可用于识别各种耐药突变，包括具有临床相关性的突变。

　　总之，我们的研究清楚地表明，由于获得性突变（例如 G2032R）而对克唑替尼（Crizotinib）耐药的癌症患者可能会受益于。值得注意的是，尽管在克唑替尼耐药的 ALK 融合阳性 NSCLC 患者中偶尔会观察到溶剂前沿突变，但 G2032R 突变在 ROS1 阳性 NSCLC 中的频率尚未确定。由于继发性突变，例如守门人突变，可能并不代表获得性克唑替尼耐药的主要机制，因此需要额外的研究来阐明其他耐药机制。这些研究的结果对于在临床实践中选择针对 TKI 耐药性的最佳治疗策略至关重要。虽然，ROS1易位，卡博替尼可能能够预防或克服对 ROS1 抑制剂的耐药性。微信扫描下方二维码了解更多：