奥希替尼(AZD9291)耐药靶点的分析

　　奥希替尼（AZD9291）是第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂，可有效延长EGFR突变，尤其是T790M突变的非小细胞肺癌（NSCLC）患者的生存期；然而，对AZD9291的获得性耐药是不可避免的，因此对耐药靶点的探索迫在眉睫。

　　方法

　　考虑到环状 RNA（circRNA）在癌症中的重要作用，我们建立了 AZD9291 抗性 NSCLC 细胞系（H1975/AZDR 和 HCC827/AZDR），并使用微阵列分析来确定细胞的 circRNA 表达谱。通过逐渐增加药物浓度来诱导 H1975/AZDR 和 HCC827/AZDR 细胞系。CircRNA 微阵列表达谱来自 H1975、HCC827、H1975/AZDR 和 HCC827/AZDR 细胞，并通过定量逆转录 PCR 进行验证。表达数据进行了生物信息学分析。

　　结果

　　成功建立H1975/AZDR和HCC827/AZDR细胞系。H1975/AZDR和HCC827/AZDR细胞的半数抑制浓度和侵袭能力显着增强。H1975/AZDR和HCC827/AZDR的增殖率远低于H1975和HCC827。微阵列分析鉴定了在 H1975、HCC827、H1975/AZDR 和 HCC827/AZDR 细胞中差异表达的 15504 个 circRNA。其中，7966个上调，7538个下调超过两倍。我们预测了顶部失调的 circRNA 的可能 miRNA。此外，京都基因和基因组百科全书通路分析表明，最受调节的 circRNA 可调节多种癌症和癌症相关通路。

　　结论

　　我们的研究结果表明，circRNA 可能在 NSCLC奥希替尼（AZD9291）耐药中发挥作用，并且可能是基因治疗的一个有希望的分子靶标。

　　肿瘤耐药性一直是肿瘤临床治疗中的难题。大量研究试图通过耐药细胞系的表达谱寻找与耐药相关的基因。建立耐药细胞系模型最常用的方法之一是逐渐增加药物浓度或延长恒定浓度药物的作用时间,使耐药细胞系药物敏感性降低（例如 IC50) 获得。通过比较耐药细胞系和亲本细胞系之间差异表达的基因，可以研究耐药机制和耐药相关基因。但是，目前还没有统一的标准来确定耐药细胞系模型的建立是否成功。

　　在之前的一项研究中，紫杉醇抗性 A549 细胞系 (A549/Taxol) 是通过用逐渐增加的紫杉醇浓度处理 A549 细胞六个月而产生的。18 个A549/Taxol 细胞呈纺锤形并拉长，A549/Taxol的 IC50值是 A549 的 72.87 倍。AZD9291 耐药细胞系 PC9/AZDR 是通过在逐渐增加的 AZD9291 浓度（从 10 nM 到 1 μM）中培养大约六个月而建立的，PC9/AZDR 细胞也对其他 EGFR-TKI 耐药，例如CO1686、阿法替尼、吉非替尼和厄洛替尼。AZD9291 抗性细胞系 HCC827/AZDR 是通过在 AZD9291 梯度增加（从 0.02 到 0.16 μM）下持续六个月进行选择而产生的。HCC827/AZDR 细胞的 IC50值是 HCC827 细胞的 315.8 倍。在形态学上，HCC827/AZDR 表现出间充质样表型，包括纺锤体样外观、细胞-细胞连接缺失和极性。

　　在本研究中，AZD9291 抗性 H1975 和 HCC827 细胞系（H1975/AZDR 和 HCC827/AZDR）通过将 AZD9291 的浓度从 93 nM 逐渐增加到 10 uM 六个月来诱导。我们的 H1975/AZDR 和 HCC827/AZDR 细胞也显示出间充质样表型，例如纺锤形和细胞间粘附丧失。H1975/AZDR和HCC827/AZDR细胞的IC50和侵袭能力显着增强。H1975/AZDR 和 HCC827/AZDR 的增殖率远低于 H1975 和 HCC827，这可能是亲本和抗性系之间某些细胞周期调节分子差异表达的结果。将进行进一步的研究以调查相关的细胞周期调节机制。

　　在本研究中，我们通过 KEGG 分析研究了失调的 circRNA 的功能。间与失调circRNAs中，P53，mTOR的，和粘着信号传导途径相关的途径已先前已被证明在癌症细胞对非小细胞肺癌，的AZD9291电阻响应枢转路径，表示失调circRNAs可能在细胞对耐药性的反应中具有重要意义。黄等人揭示 p53 的丧失始终与对 EGFR 抑制剂的获得性耐药相关，并且 p53 的恢复足以逆转 EGFR 抑制剂耐药性。mTOR通路广泛参与调节细胞增殖、生长、凋亡等细胞功能，mTOR激活常与多种肿瘤的耐药、发生和发展有关。研究表明，mTOR 通路的抑制可以通过自噬诱导调节肿瘤耐药性。失调的 circRNA 是否可以调节 NSCLC 的增殖、凋亡、迁移、侵袭、自噬和 AZD9291 耐药性，需要进一步研究。

　　据我们所知，这是第一项报告 circRNA 在 NSCLC 对 奥希替尼（AZD9291）耐药中异常表达的研究。我们的研究结果为NSCLC患者的治疗提供了有前景的潜在分子靶点，为NSCLC的分子靶向药物治疗提供了坚实的基础和有效的工具。需要进一步的研究来确定失调的 circRNA 对 AZD9291 耐药的 NSCLC 的影响。微信扫描下方二维码了解更多：