来那度胺(lenalidomide)对恶性胶质瘤细胞系的抗肿瘤作用

　　胶质母细胞瘤是一种恶性脑肿瘤，具有高度侵袭性的增殖和侵袭能力。尽管通过积极的手术切除和包括替莫唑胺和放射治疗在内的辅助治疗进行治疗，但患者的预后仍然很差。来那度胺（lenalidomide）是沙利度胺的衍生物，已知是一种免疫调节剂，已用于治疗造血系统恶性肿瘤。有许多研究表明来那度胺在造血细胞中具有抗肿瘤作用，但在神经胶质瘤细胞中没有。本研究旨在证明来那度胺对恶性胶质瘤细胞系的抗肿瘤作用。使用 Coulter 计数器评估来那度胺对恶性胶质瘤细胞（A-172、AM-38、T98G、U-138MG、U-251MG 和 YH-13）的生长抑制作用。使用荧光激活细胞分选仪、蛋白质印迹分析和定量实时逆转录聚合酶链反应 (RT-qPCR) 在恶性胶质瘤细胞系 (A-172, AM-38) 中检查来那度胺的抗肿瘤作用机制。结果显示，来那度胺以浓度依赖性方式降低恶性胶质瘤细胞的数量。DNA 流式细胞仪分析表明 G 处的细胞比例增加来那度胺治疗后的0/G1期。蛋白质印迹分析和 RT-qPCR 显示 p53 活化和 p21 表达在用来那度胺处理的神经胶质瘤细胞中增加。Western印迹分析显示没有发生PARP的切割；然而，证实了 Bax 蛋白的表达增加、caspase-9 的切割和 caspase-3 的切割。FACS 分析也支持来那度胺治疗恶性神经胶质瘤细胞系后很少发生细胞凋亡诱导的结论。总之，由于细胞周期分布的改变，来那度胺对胶质瘤细胞具有抗肿瘤作用。

　　来那度胺（lenalidomide）的抗肿瘤活性先前已在造血细胞中报道。Kuramitsu等人在体外和体内证明了来那度胺对免疫系统的影响。来那度胺由于增强 T 细胞干扰素-γ 分泌中的细胞毒性作用而发挥抗肿瘤作用。Kuhnol等人报道，来那度胺在体外模型中增强了免疫反应。这些研究评估了来那度胺诱导的免疫细胞的抗肿瘤作用。然而，尚未证实来那度胺对恶性胶质瘤细胞的作用。我们专注于来那度胺的直接抗肿瘤作用，例如它对细胞周期的影响和对胶质瘤细胞凋亡的诱导。神经胶质瘤细胞中抗肿瘤作用的许多机制仍然未知。新发现来那度胺在恶性胶质瘤细胞系中表现出细胞周期停滞的直接抗肿瘤作用。

　　在 Coulter 计数器测定中，恶性神经胶质瘤细胞的数量以浓度依赖性方式减少。在大多数细胞系中，来那度胺（lenalidomide）的抗肿瘤作用在 10 μM 的浓度下得到证实。

　　我们使用 A-172 和 AM-38 神经胶质瘤细胞系检查了来那度胺抗肿瘤作用的机制。将胶质瘤细胞暴露于来那度胺，我们采用蛋白质印迹分析、流式细胞术分析和使用 RT-qPCR 的 mRNA 表达分析评估各种蛋白质的表达水平，以观察细胞周期分布和细胞凋亡中发生的变化。

　　我们实验所用的浓度为 10 μM，因为我们的结果表明，来那度胺（lenalidomide）的抗肿瘤作用在低于 10 μM 的浓度下观察到。此外，Warren 的 I 期试验表明，来那度胺的安全剂量范围为 2.5 至 116 mg/m2。给予 20 mg/m2的来那度胺后，体内血药浓度上升至约 2.2 μM，并在 1 小时达到峰值。我们推断 10 μM 的来那度胺临床使用是合理的，没有有害的副作用。

　　在先前关于使用造血癌细胞的来那度胺（lenalidomide）的研究中，观察到了各种抗肿瘤作用，包括生长抑制作用、诱导细胞凋亡、抗血管生成活性和免疫活性。此外，发现诱导细胞凋亡与 caspase-3 激活有关。除了这些直接的抗肿瘤作用外，还描述了通过抑制碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF) 和血管内皮生长因子 (VEGF) 介导的抗血管生成。

　　总之，来那度胺（lenalidomide）在恶性胶质瘤细胞中显示出抗肿瘤作用。它诱导p21和p53的表达增加，确实发生了细胞周期停滞，而对胶质瘤细胞的凋亡诱导几乎没有影响。微信扫描下方二维码了解更多：