以 0、3、10 或 30 mg/kg厄达替尼（erdafitinib）口服给药携带 SNU-16 人胃癌（FGFR2扩增）异种移植肿瘤的小鼠。在给药后 0.5、1、3、7、16 和 24 小时收集肿瘤组织和小鼠血浆（每个时间点 3 只小鼠）。将肿瘤组织冷冻在液氮中，压碎并悬浮在裂解缓冲液 [25 mmol/L Tris-HCl (pH 7.5)、2 mmol/L EDTA (pH 8)、2 mmol/L EGTA (pH8)、1% Triton X-100, 0.1% SDS, 50 mmol/L β-甘油磷酸二钠, 2 mmol/L Na3VO4, 4 mmol/L 焦磷酸钠, 2x 热蛋白酶/磷酸酶抑制剂混合物)。离心后，将上清液应用于 SDS-PAGE 并转移到 PVDF膜上。
将膜在 Odyssey 封闭缓冲液中封闭 1 小时，与抗磷酸化 FGFR Y653/654 或抗 FGFR2一起孵育抗体在 4°C 下过夜，并在 TBST 缓冲液中洗涤 3 次，然后在 Odyssey 封闭缓冲液中与 Alexa Fluor 680 偶联山羊抗兔 IgG 在室温下孵育 2 小时。在 LI-COR Odyssey 红外成像仪上读取和量化信号。
当肺癌患者来源的异种移植物（PDX，LUX001）的肿瘤达到约 400 mm3, 小鼠口服 12.5 mg/kg JNJ-42756493。在给药后 1、2、4、8 和 24 小时收集肿瘤和小鼠血浆。在含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的 RIPA 缓冲液中裂解液氮冷冻肿瘤组织。离心（12,000 rpm 15 分钟）后，将上清液应用于 SDS-PAGE 并转移到 PVDF 膜上。将膜在含有 0.1% Tween 20 (TBST) 的 Tris 缓冲盐水中的 5% 牛血清白蛋白中封闭，然后在 4°C 下与抗磷酸化 ERK一起孵育过夜，在 TBST 中洗涤，然后与 HRP 偶联的山羊抗兔 IgG在室温下孵育 2 小时。剥离膜并重新印迹以获得总 ERK1/2。
厄达替尼在分离的重组 FGFR 激酶上观察到的有效激酶结合和抑制活性在经过工程改造以表达 FGFR 家族成员的 BaF3 细胞系中得到了概括。JNJ-42756493 抑制 FGFR1、3 和 4 表达细胞的增殖，IC50值分别为 22.1、13.2 和 25 nmol/L。JNJ-42756493 在这些细胞中活性的特异性通过在 IL3 存在下对增殖没有影响得到证实。
相比之下，由于在生化试验中对 VEGFR2 的活性相对较强，厄达替尼对表达 VEGFR2 的 BaF3 细胞的活性明显较弱。同样，与其他具有高结合亲和力的激酶（RET、PDGFRA、PDGFRB、KIT、TIE1、LCK、LYN、ABL1 和 BLK）相比，JNJ-42756493 对表达 FGFR 激酶的 BaF3 细胞的效力至少高出10倍。
为了证实厄达替尼对 FGFRs 与 VEGFR 的选择性是化合物依赖性的并且与测定无关，在相同的生化和 BaF3 细胞激酶测定中测试了双 VEGFR/FGFR 抑制剂 brivanib (BMS-540215)。与 JNJ-42756493 相比，brivanib表现出比 FGFRs 更高的抗 VEGFR2 效力，与之前的报道一致。总的来说，这些结果突出了厄达替尼对 FGFR 家族的生化和功能选择性，对 VEGFR2 和其他激酶的脱靶活性有限。更多详情可咨询下方微信。
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