EMT 还介导了对劳拉替尼（洛拉替尼）的耐药性。一名 59 岁的男性患者被诊断患有转移性 ALK 重排肺腺癌，接受了克唑替尼的一线治疗。他表现出部分反应和 4.2 个月的 PFS。在克唑替尼治疗下疾病进展时，开始使用劳拉替尼进行二线治疗。值得注意的是，此时没有对组织或血浆样本进行重复的分子分析。每天使用 75 mg 劳拉替尼进行序贯二线治疗，结果部分缓解，即根据 RECIST 标准，-78%。6.9 个月后，疾病进一步进展，对原发部位进行了肺部重新活检。观察到 C1156Y 和 G1269A ALK 突变以及 EML4-ALK 变体 3 重排 (V3)，这两种突变都位于同一等位基因(即复合突变)。
接下来，对源自该活检样本的细胞系进行了工程改造，细胞存活测定显示该细胞系对劳拉替尼（洛拉替尼）敏感。因此，C1156Y/G1269A 复合突变很可能不是劳拉替尼耐药的原因。表达带有 G1269A、C1156Y 或复合 C1156Y/G1269A 突变的 EML4-ALK V3 的 Ba/F3 细胞是为了更详细地研究这种 ALK 复合突变的影响而创建的。那些表达 EML4-ALK 和复合突变的 Ba/F3 细胞对劳拉替尼治疗和单一突变没有反应。C1156Y/G1269A 突变也导致对克唑替尼的耐药性。接下来，将上述对劳拉替尼 (MR57-S) 具有良好敏感性的源自患者的细胞系暴露于增加剂量的劳拉替尼，直到肿瘤细胞产生耐药性。MR57 耐药 (MR57-R) 细胞系对劳拉替尼具有高度耐药性，并且在两种细胞系中均存在 C1156Y 和 G1269A 突变。MR57-S 和 MR57-R 细胞的免疫印迹显示 ALK 抑制导致 ERK、AKT 和 S6 磷酸化受阻，并诱导 MR57-S 细胞凋亡。形成鲜明对比的是，MR57-R 细胞仍然具有丰富的细胞外信号调节激酶 (ERK-)、AKT 丝氨酸/苏氨酸激酶 (AKT-) 和核糖体 S6 激酶 (S6) 磷酸化，以及细胞凋亡水平降低。因此，可能会通过旁路轨道产生脱靶阻力机制。作者发现 MR57-S 和 MR57-R 细胞的形态存在显着差异。随后，评估了 EMT 标志物的差异表达。在 MR57-S 细胞中观察到高水平的 E-钙粘蛋白，但没有 N-钙粘蛋白和波形蛋白的表达。然而，在 MR57-R 细胞中，E-钙粘蛋白表达缺失，但可以看到高水平的 N-钙粘蛋白、Snail 和波形蛋白 。显然，MR57-R 细胞具有许多表征间充质表型的特性，并且两种细胞系的 RNA 测序作为一种额外的工具来确认与 EMT 相关的几个基因在 mRNA 水平上的异常表达：在 mRNA 水平上，增加观察到波形蛋白、CDH-2(N-钙粘蛋白)、SNAIL、ZEB1、FGFR1 和 TGFB1/2 表达水平，以及 EPCAM、CDH-1(E-钙粘蛋白)和 ICAM1 水平降低，与 MR57-S 相比细胞。此外，在两种细胞系中都进行了肌动蛋白微丝的鬼笔环肽染色。劳拉替尼敏感细胞形成肌动蛋白环并呈簇状增殖，这是上皮表型的特征。另一方面，MR57-R 含有间充质分化细胞中常见的肌动蛋白应力纤维。为了确认在劳拉替尼治疗后肿瘤进展时，患者的肿瘤是否出现了 EMT 相关特性，进行了克唑替尼前和劳拉替尼进展时的免疫组织化学分析。然而，在劳拉替尼治疗下进展时，患者的肿瘤未观察到 EMT 特征。
因此可以得出结论，在劳拉替尼（洛拉替尼）下的进展时间左右，启动了 EMT 程序，如上述细胞培养实验所示。有趣的是，另一名患者在没有任何导致 ALK-TKI 耐药的突变的情况下对劳拉替尼产生了耐药性。在用克唑替尼和色瑞替尼治疗后，这位终生不吸烟的 58 岁女性接受了劳拉替尼治疗，反应持续了 16 个月。来自该患者活检样本的细胞系也具有间充质特征，鬼笔环肽染色证实了肌动蛋白应激纤维的存在。当用 EMT 标记物对患者的克唑替尼前和劳拉替尼后活检样本进行免疫组织化学染色时，观察到劳拉替尼后样本中波形蛋白表达的增强。这一发现表明，在出现对劳拉替尼（洛拉替尼）的耐药性时，肿瘤中至少存在部分 EMT。
更多关于劳拉替尼的信息可扫描下方二维码咨询：
