阿西替尼(Axitinib)作为上皮性卵巢癌治疗剂的临床前评估

　　阿西替尼（Axitinib）是一种小分子酪氨酸激酶抑制剂，对各种实体瘤具有抗癌活性。我们研究了阿西替尼在上皮性卵巢癌 (EOC) 中的抗癌作用。我们用阿西替尼处理 EOC 细胞（A2780、HeyA8、RMG1 和 HeyA8-MDR），以评估其对细胞活力、细胞凋亡和迁移的影响。进行蛋白质印迹以评估 VEGFR2、ERK 和 AKT 水平，并进行 ELISA 和 FACS 以根据阿西替尼治疗评估细胞凋亡。此外，体内使用 A2780、RMG1 和 HeyA8-MDR 细胞系进行异种移植物实验。我们用 EOC 的患者衍生异种移植模型 (PDX) 重复了实验。Axitinib 显着抑制细胞存活和迁移，并增加 EOC 细胞的凋亡。A2780、RMG1 和 HeyA8 中 VEGFR2 的表达和 AKT 和 ERK 的磷酸化在阿西替尼治疗下呈剂量依赖性降低，但在 HeyA8-MDR 中没有。在体内实验中，与对照相比，阿西替尼在药物敏感（A2780）的异种移植模型、铂敏感 EOC 的透明细胞癌（RMG1）和 PDX 模型中显着降低了肿瘤重量，但对耐药细胞系（HeyA8-MDR）无效) 或经过大量预处理的耐火 PDX 模型。阿西替尼通过抑制与细胞增殖、凋亡和迁移相关的 VEGFR 信号，在药物敏感或透明细胞 EOC 细胞中显示出显着的抗癌作用，但在耐药细胞中没有。

　　阿西替尼（Axitinib）是一种高选择性的 VEGFR 酪氨酸激酶抑制剂，被认为是治疗转移性肾细胞癌最有效的物质之一。在这项研究中，我们展示了阿西替尼的抗血管生成和抗肿瘤活性，具有用于治疗 EOC 的潜力。在体外研究表明，阿西替尼以剂量依赖性方式显着抑制 EOC 细胞的增殖和迁移，并增加细胞凋亡。最初，细胞活力实验表明，阿西替尼在所有 EOC 细胞中都显示出细胞毒活性。此外，在 EOC 细胞系中证实了阿西替尼诱导的细胞凋亡。然而，在证实 EOC 细胞系中 VEGFR 及其下游信号传导的蛋白质印迹中，在 HeyA8-MDR 中未观察到阿西替尼诱导的 VEGFR2 抑制作用、AKT 磷酸化和 ERK。与 A2780 和 HeyA8 不同，迁移试验显示阿西替尼对 HeyA8-MDR 没有影响。基于这些结果，我们假设阿西替尼通过靶向多种途径来抑制 EOC 细胞，包括血管生成、AKT 和 ERK 信号通路。此外，进行侵袭相关的MMP2/MMP9 ELISA以进一步解释细胞活力实验和细胞信号测定之间的差异，但在HeyA8-MDR和其他细胞系中没有发现差异。这可能是由于肿瘤微环境的差异，但无法通过实验给出确切的机制。在原位小鼠模型中，观察到阿西替尼对铂敏感细胞系和卵巢透明细胞系的肿瘤减少，但阿西替尼（Axitinib）对耐药细胞系的肿瘤无效。在 PDX 模型中观察到相同的结果。因此，在我们的实验中，我们得出结论，阿西替尼作为单一药物的抗肿瘤作用仅在药物敏感的 EOC 模型中显着，但在耐药 EOC 细胞系异种移植物或 PDX 模型中并不显着。

　　在我们的研究中，阿西替尼（Axitinib）在铂类耐药组中的作用比铂类敏感组要弱。耐药性可以通过细胞内活性药物浓度、药物-靶点相互作用、靶点介导的细胞损伤、损伤诱导的凋亡信号或凋亡效应子的变化来解释，这些变化可能会影响对阿西替尼的反应。在之前的一项研究中，分析了耐铂细胞的生物学特性抗性细胞系表现出 DNA 铂化水平降低和受损 DNA 修复速度加快，这表明药物摄取、解毒和排泄以及 DNA 修复途径在抗性表型中起核心作用。在目前的研究中，阿西替尼在细胞活力测定和细胞凋亡测定中对耐药细胞系（HeyA8-MDR）有效，但在细胞信号测定和体内无效抗药异种移植模型的实验。我们还重试了蛋白质印迹，以确认 HeyA8 和 HeyA8-MDR 的 VEGFR 及其下游信号传导的表达。在阿西替尼处理 HeyA8 细胞 4 小时后，磷酸化 VEGFR2、AKT 和 ERK 的表达受到抑制，但相反，在 HeyA8-MDR 中未观察到这种变化。为了解释细胞活力测试结果和细胞信号分析结果之间的差异，我们在 HeyA8 和 HeyA8-MDR 中进行了侵袭相关的 MMP2/9 ELISA。然而，没有针对 HeyA8-MDR 测量 MMP2 的结果，并且阿西替尼对 MMP2 的表达抑制显示 HeyA8 和 HeyA8-MDR 之间没有差异，如补充数据所示。不幸的是，这些额外的实验无法揭示一个明确的机制。这些差异可以通过细胞系和组织之间的反应差异来解释。在癌症研究中，体外实验主要用于研究导致不受控制的细胞生长的基因调控和信号传导。进行体内实验以评估癌细胞与环境的相互作用，并产生更多的信息结果，因为微环境是迁移策略和癌细胞入侵效率的关键决定因素。

　　据我们所知，这是首次评估阿西替尼（Axitinib）在 EOC 临床前模型中作为抗癌治疗剂的疗效和机制。在这项研究中，我们证明了阿西替尼的显着抗肿瘤作用与药物敏感的 EOC 细胞、异种移植物和 PDX 模型中的抗血管生成有关。我们的研究结果对于将阿西替尼作为单一药物用于治疗药物敏感的 EOC 患者具有重要的临床意义，这些患者如果接受常规紫杉烷和铂类化疗，则极有可能出现毒性。然而，阿西替尼对耐药性 EOC 的效果并不乐观，因此需要评估阿西替尼与其他靶标药物（包括免疫治疗）的联合治疗的临床试验。

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