尼达尼布(nintedanib)减少肌肉纤维化并改善肌肉功能

　　杜氏肌营养不良症 (DMD) 是一种以进行性骨骼肌无力为特征的遗传性疾病。肌营养不良蛋白缺乏会导致肌肉收缩期间肌膜不稳定，导致肌肉坏死和纤维脂肪组织替代肌肉。已经开发了几种疗法来抵消纤维化过程。我们报告了一种酪氨酸激酶抑制剂尼达尼布（nintedanib）在 DMD 的mdx小鼠模型中的作用。尼达尼布在体外降低了人成纤维细胞的增殖和迁移，并降低了纤维化基因如COL1A1、COL3A1、FN1、TGFB1和PDGFA的表达。我们处理了七个mdx小鼠服用 60 mg/kg/day nintedanib 1 个月。电生理学研究表明，在接受治疗的动物中，运动动作电位的幅度增加，运动单位电位的形态得到改善。组织学研究表明骨骼肌中存在的纤维化区域显着减少。对治疗小鼠肌肉 mRNA 表达的分析显示Col1a1、Col3a1、Tgfb1和Pdgfa减少。蛋白质印迹显示骨骼肌中胶原蛋白 I 的表达减少。总之，尼达尼布在治疗 1 个月后减少了肌营养不良症小鼠模型中的纤维化过程，表明它有可能用作 DMD 患者的治疗药物。

　　在本研究中，我们发现 nintedanib 在治疗 4 周后可减少 10 个月大的mdx小鼠的骨骼肌纤维化。纤维化组织的减少与电生理测试证明的肌肉功能的改善有关。体外实验表明，尼达尼布降低了成纤维细胞的增殖和迁移，降低了纤维化基因的表达，支持了该药物的抗纤维化作用。

　　治疗肌肉营养不良的药理学方法旨在通过恢复突变基因的正常表达或通过干扰由缺乏特定蛋白质引发的病理纤维化级联反应来靶向纤维坏死和纤维化和脂肪组织沉积的复杂机制。最近在对纤维化过程的理解方面取得了进展。持续的肌纤维损伤与炎症细胞（主要是巨噬细胞）对骨骼肌的慢性浸润有关。这些细胞通过激活存在于骨骼肌中的成纤维脂肪祖细胞和成纤维细胞释放有助于纤维化过程的细胞因子。在这些细胞因子中，PDGF家族的生长因子可能具有重要作用。来自文献的一系列证据表明，PDGF-AA 在肌肉营养不良中具有促纤维化作用。用伊马替尼（一种抑制 v-Abl、c-kit 和 PDGFRα 的 TKI）治疗mdx小鼠可减少肌肉纤维化。PDGF-BB 的作用还没有那么明确。尽管似乎 PDGF-BB 可能在许多组织中观察到的纤维化中发挥作用，但一些作者认为它也可以在体内肌肉再生中发挥重要作用。

　　尼达尼布在体外显示可抑制成纤维细胞增殖和迁移，并在不同的肺纤维化动物模型中发挥抗纤维化活性。我们观察到，在尼达尼布治疗 4 周后，mdx小鼠的肌肉纤维化减少了。这种效应可能通过降低成纤维细胞增殖、迁移率和降低细胞外基质不同成分的表达来解释。DMD 中的骨骼肌纤维化是由不同类型的胶原蛋白（如 I、III 和 VI 型）以及纤连蛋白的积累引起的。我们专注于胶原蛋白 VI 和 III，因为它们是细胞外基质的主要成分，它们的水平与肌肉破坏相关。我们已经观察到这些细胞外基质成分在体内和体外的表达减少。此外，我们还观察到促纤维化生长因子（如 PDGF-AA 或 TGF-β）的表达减少，这肯定有助于治疗小鼠的纤维化过程减弱。然而，我们观察到尼达尼布（nintedanib）治疗的mdx肌肉中 CTGF 水平升高小鼠，这可以通过没有被我们的药物抑制的增强的纤维化途径来解释。这种效应表明，使用阻断不同途径的药物组合治疗可能具有更强大的抗纤维化作用。使用仅含 1% FBS 的细胞培养条件，与 VEGF 或 bFGF 相比，PDGF-AA 对成纤维细胞增殖的刺激最为显着，而 VEGF 或 bFGF 在这些培养条件下没有影响。因此，靶向 PDGF-AA 激活的主要受体 PDGFRα 的药物可用于治疗肌肉营养不良。

　　总之，尼达尼布（nintedanib）减轻了mdx小鼠骨骼肌的纤维化并诱导了功能性肌肉的改善。尼达尼布减少成纤维细胞增殖和趋化性以及减少促纤维化基因的表达可能解释了这种药物的作用机制。在支持未来在 DMD 患者临床试验中对尼达尼布进行测试之前，该概念验证研究中提供的数据应在更大的临床前研究中得到证实。然而，由于缺乏对年轻患者使用尼达尼布的经验，因此测试该药物的安全性、耐受性和有效性的临床试验无疑具有挑战性。微信扫描下方二维码了解更多：