达拉非尼(dabrafenib)可有效地激活人孕烷X受体

　　人孕烷 X 受体 (hPXR) 由大量内源性和外源性化合物激活，在控制解毒酶和转运体调节肝脏和胃肠道药物代谢和清除方面发挥关键作用。hPXR 还参与多药耐药性的发展和增强的癌细胞侵袭性。此外，药物无意中激活它可以介导药物-药物相互作用并导致严重的不良事件。在这种情况下，怀疑抗癌 BRAF 抑制剂达拉非尼（dabrafenib）激活 hPXR 和人类组成型雄甾烷受体 (hCAR) 的潜力尚未得到彻底研究。使用不同的报告细胞分析，我们证明 dabrafenib 可以像参考激动剂 SR12813 一样有效地激活 hPXR，而它不会激活小鼠或斑马鱼 PXR 或 hCAR。我们还发现，dabrafenib 与重组 hPXR 结合，诱导结肠 LS174T-hPXR 癌细胞和人肝细胞中 hPXR 反应基因的表达，最终增加 LS174T-hPXR 细胞的增殖。我们的研究表明，通过使用一组不同的细胞技术，可以改进对新开发药物的 hPXR 激动剂活性的评估。

　　dabrafenib 的推荐剂量为 150 mg，每日两次，口服给药，血浆浓度为 2160 ng/mL 。给药后，dabrafenib 主要通过氧化代谢，生成羟基-dabrafenib，随后生成羧基-dabrafenib，羧基-dabrafenib 经过脱羧生成去甲基-dabrafenib，这是一种活性衍生物，可进一步转化为少量氧化产物。已知 CYP3A4 和 CYP2C8 在这些代谢步骤中起主要作用，达拉非尼显示在体外和体内诱导 CYP3A4 和 CYP2D6 表达。这些研究表明，参与药物代谢的基因的主要调节因子，例如核受体 hPXR 或 hCAR，可以介导细胞对达拉非尼的反应并影响其他相关药物的作用。然而，没有研究表征达拉非尼的 hPXR 激动剂活性。我们的研究结果首次表明，与参考 hPXR 激动剂 SR12813 相似，达拉非尼是各种细胞系中过度表达这种核受体的 hPXR 的选择性激活剂。对于 dabrafenib 和 SR12813，在细胞类型方面可以注意到 hPXR 反式激活的差异。这可能是由于 HepG2、LS174T、22RV-1 和 HeLa 细胞的代谢能力不同。总之，这些结果证实了达拉非尼可以调节参与异生物质代谢的关键酶的表达，并证明这种作用与 dabrafenib 的 hPXR 激动剂特性有关。这些结果具有临床重要性，因为 dabrafenib 可以直接影响其自身的代谢或其他药物或药物的代谢，特别是 MEK 抑制剂，例如被批准与 达拉非尼联合用于治疗转移性黑色素瘤的曲美替尼。在这方面，我们目前正在研究 dabrafenib 是否可以增加过表达 hPXR 的黑色素瘤细胞中代谢酶的活性，以及这是否会影响与曲美替尼联合治疗的疗效。

　　虽然 dabrafenib 通常通过靶向 BRAF V600E来抑制癌细胞的增殖，但它也被证明可以诱导表达野生型 BRAF 和突变 RAS 的肿瘤细胞系的增殖。体外研究报告了 BRAFV600E的半抑制浓度 (IC50) 值为 0.65 nM。在这里，我们展示了达拉非尼可以刺激 LS174T-hPXR 细胞的生长，EC5028纳米。这种效应仅在 hPXR 稳定过表达时才观察到，强烈表明这种效应至少部分是由 hPXR 介导的，也可能归因于 FGF19 表达的增加，这是一种已知参与细胞增殖的 hPXR 靶基因。并且在用达拉非尼处理的LS174T-hPXR细胞中显着增加。有趣的是，PXR 配体利福平也被证明可以诱导 FGF19 介导的 PXR 转染的 LS174T 细胞的增殖。在其血浆浓度（2160 ng/mL 或 4.15 μM）下，预计达拉非尼对 BRAFV600E均具有活性和 hPXR，表明使用较低浓度的 dabrafenib 可以提高其选择性，同时保持其疗效。另一种选择是设计对 BRAF 具有相同亲和力但不会激活 hPXR 的达拉非尼类似物。我们进行了此类工作，并能够合成缺乏 PXR 活性的 dabrafenib 类似物（Schneider 等人，正在准备中）。

　　由于许多药物如抗雄激素、抗雌激素、抗癫痫或抗病毒药物是 hPXR ，我们的结果进一步强调需要评估以更彻底的方式开发的药物的潜在激动剂活性。事实上，以前评估这种活性的临床前研究通常是在小鼠或大鼠模型中进行的，但我们的结果清楚地表明，达拉非尼（dabrafenib）对 PXR 的小鼠直系同源物没有显示任何显着的活性。为了改进对 PXR 激动剂活性的评估，我们建议使用适应的细胞模型来筛选 hPXR 激动剂活性，并且我们提出了一组体外技术，可以对新开发的药物进行这种评估。这些原始模型还可以用于设计当前使用的没有 hPXR 结合和激活的药物的新类似物。

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